ХЦВ тест крви: шта је то?

Share Tweet Pin it

Према концептима савремене медицине, преваленција преваленције на планету припада вирусима. Човјечанство је морало да користи пуно сила и ресурса за борбу против њих. Изузетно важна улога припада дијагнозе вирусних оштећења јетре, нарочито хепатитис Ц. Правилна декодирање лабораторијских параметара за детекцију болести је тешко због великог броја лажних позитивних резултата теста крви. Стога је тачан избор и тумачење студије толико важан.

Методе откривања вируса

Хепатитис Ц вирус (хцв) је мали ланац РНК унутар виралног омотача, који користи генетски материјал ћелија јетре ради репродукције. Њихов непосредни контакт води до:

  • Почетак запаљеног процеса у јетри;
  • Уништење ћелија јетре (цитолиза);
  • Лансирање имунолошких механизама са синтезом специфичних антитела;
  • Аутоимунска агресија имунских комплекса против упаљених хепатоцита.

Вирус хепатитиса Ц, који улази у тело, узрокује веома спор имунолошки одговор, што га оставља неочекивано дуго времена. Болест се често налази само на стадијуму цирозе јетре, иако све време вирусне честице и њихова одговарајућа антитела циркулишу у крви. Ово је основа за све познате методе дијагностике хцв инфекције. То укључује:

  1. Серолошки тестови у лабораторијским условима;
  2. ПЦР-дијагностика (полимеразна ланчана реакција);
  3. Експрес тестови за утврђивање болести код куће.

Видео о хепатитису Ц:

Могуће индикације за студију

Свако може ићи на тест за хцв-инфекцију. Посебно сведочење за ово није неопходно, изузев жеље особе да се подвргне овом тесту крви. Али постоји категорија лица која су обавезна за истрагу. То укључује:

  • Донатори крви;
  • Људи који су примили трансфузију крви, његове компоненте или препарате на основу тога;
  • Повећање нивоа трансаминазама јетре (АЛТ, АСАТ), нарочито након претходних хируршких интервенција, радне и друге медицинске манипулације;
  • Сумња на вирусни хепатитис Ц или на потребу да се ова дијагноза искључи;
  • Негативни тестови за вирусни хепатитис Б у присуству симптома запаљења јетре;
  • Контрола ефикасности хцв-инфекције терапије и решавање проблема везаних за тактику даљег лечења.

Карактеристике серолошке дијагнозе и процене резултата

Лабораторијске анализе крви за ХЦВ обухвата детекцију антитела (имуноглобулина) класе М и Г антигенски компонента Хепатитис Ц вирус се користе за ову реакцију углавном повезани имуносорбентни теста (ЕЛИСА) и радиоимуноесејем (РИА). Лабораторијски методи за детекцију антитела су најзначајнији, јер омогућавају употребе што мање реагенси антигене комплекси најчешћих типова вируса хепатитиса Ц

За студију се прикупља око 20 милилитара венске крви из периферне вене. Она се центрифугира и седиментира како би се добила плазма (провидни део течности). Елементи облика и седимент се уклањају. Да би се избегли лажни позитивни резултати, боље је узети крв ујутру пре него што једете. Неколико дана раније, пожељно је искључити употребу лијекова, нарочито утичући на стање имунолошког система.

Резултати анализа се могу приказати на овај начин:

  1. Хцв - негативан. То значи да у организму нису откривена никаква антитела на вирус хепатитиса Ц. Нема болести;
  2. Хцв - позитиван. То указује на присуство антитела на вирус хепатитиса Ц у тестираним узорцима крви. Особа је или имала ту болест или је тренутно болесна или има хроничну форму;
  3. Анти-ХЦВ ИгГ је откривен. У овом случају, вреди размишљати о хроничном вирусном хепатитису Ц;
  4. Детектован је анти-ХЦВ ИгМ. Његово изоловано присуство говори о акутном процесу и комбинацији са анти-ХЦВ ИгГ-погоршањем хроничног.

Карактеристике брзог тестирања

Свако може да изврши тест крви само на хцв. Ово је омогућено стварање специјалних тест система за брзу дијагностику хепатитиса Ц. Њихова ефикасност је инфериорна методе лабораторија серолошке али савршено за приближну одређивање могуће инфекције у кратком временском периоду.

Можете купити или наручити систем тестирања у било којој љекарни. Укључује све што је потребно за тестирање. Анализа почиње отварањем стерилног контејнера и припремом свих компоненти. После третмана посебном салветом са антисептичким прстом, нежно је пропуштено са шкарпом. Користећи пипету, сакупља се 1-2 капи крви и пребацује се на узорак на тестној плочи. У крв додајте 1-2 капи реагенса из виале, која је део теста. Резултат треба проценити након 10 минута. Изузетно је важно да се резултат не процијени након 20 минута због могућности лажног позитивног резултата.

Изведени тест крви се може сматрати следећим:

  1. У прозору таблете појавила се једна љубичаста трака (тест је негативан). То значи да се не откривају антитела на хцв у тестној крви. Особа је здрава;
  2. У прозору таблете појавили су две љубичасте траке (тест је позитиван). Ово указује на присуство антитела у крви под истрагом и повезивање организма са вирусним хепатитисом Ц. Такви људи су подложни бољим методама серолошке дијагнозе безуспешно;
  3. У прозору таблета није појавила ни једна трака. Систем тестирања је корумпиран. Препоручујемо поновно испитивање.

Карактеристике ПЦР дијагностике

Полимеразна ланчана реакција је најсавременији начин откривања генетског материјала било које ћелије. Што се тиче вирусног хепатитиса Ц, метода омогућава откривање молекула РНК вирусних честица. Ово се може учинити квалитативно и квантитативно. Први метод можда није информативан ако број честица вируса у крви под истрагом не достигне граничну вредност. Друга метода вам омогућава да прецизно наведете број откривених ланаца вируса РНК и да је осетљивији.

Анализа може бити представљена следећим резултатима:

  1. Хцв РНА није детектована. То значи да у тестној крви нема честица вируса;
  2. РНА хцв је детектована. То указује на инфекцију с хепатитисом Ц;
  3. Квантитативни хцв-ПЦР тест се изводи ради процене степена инфекције крви пацијента и активности мултипликације вируса у организму. Разматрано је високо вирусно оптерећење крви од 600 до 700 ИУ / мл. Индикатори изнад ове цифре називају се веома високи, испод њега - низак вирусни оптерећење крви.

Тест крви за хцв у дијагнози вирусног хепатитиса Ц је једини информативни, приступачан и безопасан метод за потврђивање дијагнозе. Правилно тумачење и комбинација различитих начина за то минимизирају број дијагностичких грешака.

БЕСТ анти-ХЦВ (комплет 2) 12к8

Цат. № 0772

Цена: на захтев

Можете додати ставку у корпу навођењем количине

Врста паковања: картонска кутија

Сет реагенаса за иммуноензиме идентификују класа имуноглобулина Г и М то хепатитис Ц вирус у серуму / плазми крви или крвних продуката (имуноглобулини, интерфероне, криопреципитат, албумин). Пакет 2 је дизајниран да одржи 96 дефиниције, укључујући контроле - 4 рупице за сваки анализу, као и коришћење само парцијални једне траке на студије. Намјењен је за ручно подешавање, у аутоматским ЕЛИСА анализаторима отвореног типа. Ова техника се заснива на ЕЛИСА чврстој фази користећи рекомбинантне антигене. Могуће је израчунати коефицијент позитивности. Волуметријска једнакост контрола и узорака. Стандардизација услова за обављање ензимске реакције са хромогеном у термостату на 37 ° Ц Трајање реакције: 1 сат 20 минута

Функционална сврха

Препоручује се испитивање донатора крви, органа, људских ткива, диференцијалне дијагнозе вирусног хепатитиса

Техничке спецификације

Кит садржај:
1. Сложљива таблета - 1 ком.
2. Позитивне и негативне контроле - 2к1 фл.
3. Коњугат и раствор за његово разређивање (ПК) - 2к1 фл.
4. Раствор за разређивање серума (ПЦ) - 1 фл.
5. Флуфатни пуфер, концентрат (ПБС) - 2 фл.
6. Пуферски раствор подлоге (СБР) - 1 фл.
7. Тетраметилбензидин, концентрат (ТМБ) - 1 фл.
8. Стоп реагенс - 1 фл.
9. Упутства за употребу.
10. Филм за заптивање.
Узорак теста: серум или крвна плазма, са запремином не више од 40 μл.
Број протокола за спровођење ЕЛИСА: најмање 4.
Услови складиштења: на температури од +2. 8 ° Ц за целокупни рок трајања наведен на етикети.
Рок трајања комплета је 12 месеци од датума производње.
Регистровано са Росздравнадзор

ХЦВ крвни тест

Начин ширења болести може се подијелити у групе:

  • Парентерална - што значи да се инфекција јавља путем дељења медицинских инструмената, игала и нестерилног уређаја за маникир;
  • Сексуално - вирус се преноси са једног партнера у други током незаштићеног сексуалног односа;
  • Вертикални пут је инфекција фетуса од болесне мајке.

Анализе о хепатитису треба предати људи који:

  • Припремите се за планирану хоспитализацију;
  • Планирају да имају бебу;
  • Повећање билирубина, АЛТ или АСТ је откривено у клиничкој анализи;
  • Имају симптоматску слику, сличну знаковима хепатитиса Ц;
  • Они често мењају своје сексуалне партнере или преферирају незаштићени секс;
  • Су зависни од дроге;
  • Они ће бити донатор;
  • Радници у медицинским или предшколским установама морају да поднесу годишњи свеобухватни преглед, укључујући и ову врсту анализе.

тест ХЦВ крви представља лабораторијски метод дијагнозе хепатитиса Ц, његов механизам деловања је направљен да идентификује тип Иг Г и Иг М антитела које почињу да се произведе када се вирус антитела у крви. Шта је то? То су патогени микроорганизми који се јављају неколико недеља или чак месеци након инфекције.

Објашњење анализе

Истражујући структуру ХЦВ-а, научници су дошли до закључка да је овај узрочник генома повезан са животињама и биљним вирусима. Састоји се од једног гена, у који се могу уклапати информације о девет протеина. Први задатак је пенетрација вируса у ћелију, други су одговорни за стварање вирусне честице, док други у овом тренутку прелажу природне функције ћелије на себе. Они припадају структурној групи протеина, док су осталих шест неструктурних.

ХЦВ геном представља јединствену РНК везу затворену у сопствену капсулу (капсид), формирану од нуклеокапсидног протеина. Све ово обухвата љуска која се састоји од протеина и липида, она вам омогућава успешно везивање вируса у здраву ћелију.

Када вирус уђе у крвоток, почиње циркулирати кроз тело кроз крвоток. Једном у јетри, геном активира своје функције и улази у ћелије јетре, и постепено продире у њих. Хепатоцити (тзв. Ове ћелије) подлежу поремећајима током њиховог функционисања. Њихов главни задатак је "радити на вирусу", током којег треба синтетизовати вирусне протеине и рибонуклеинску киселину.

ХЦВ разликује неколико генотипова, то јест, сојеви. Тренутно постоји 6 генотипова, док свака врста има свој подврста. Сви су означени у зависности од бројева од 1 до 6. Постоје извјештаји о локализацији овог или тог вируса у свијету. На пример, 1, 2 и 3 генотип налази се у целом свету, док је 4 - у већој мери на Блиском истоку и Африци, 5 - у Јужној Африци, и 6 - у југоисточној Азији.

Основа за именовање терапије треба да буде позитиван резултат теста крви за ХЦВ, као и специфичан генотип.

Декодирање ХЦВ анализе:

  • Анти-ХЦВ Иг М је маркер активне репликације вируса хепатитиса Ц;
  • Анти-ХЦВ Иг Г је вероватно присуство вируса хепатитиса Ц;
  • Аг ХЦВ - позитиван резултат, указујући на присуство вируса хепатитиса Ц;
  • ХЦВ РНА - Вирус хепатитиса Ц је присутан у организму и активно напредује.

Лажан позитиван резултат

Још мање је вјероватно да се говори о лажно негативним резултатима, који су регистровани код пацијената који узимају имуносупресиве, или на које утичу карактеристике њиховог имунолошког система. Исти резултат се очекује ако је хепатитис Ц у раној фази развоја.

У случају неспоразума, можете се позабавити ПЦР тестом хепатитиса Ц, ако дају позитиван резултат, а затим дајте још једну анализу како бисте одредили вирусни генотип.

Термин и како се узимати

Анализа за хепатитис Ц подразумева узорак крви од пацијента на празном стомаку, с обзиром да би требало да вечерају најкасније 8 сати пре испоруке материјала. Након што се пробудите, можете пити само мало мирану воду. Биће боље ако уочи студије пратите вашу исхрану, што је учините што лакше и једноставније. Пржена и масна храна треба потпуно искључити, као и алкохол. Тешки физички рад и спорт могу утицати на поузданост резултата тестирања, па покушајте да је избегнете.

Ако желите да се тест крви за откривање хепатитиса Ц, онда морам да кажем да лекови могу нарушити реалну вредност, тако да спроведе истраживање или да почне да узима лекове, или имају неколико недеља после њиховог повлачења. Ако зауставите лечење лијекова, немогуће је изрећи лекарско сведочење, затим информишите медицинску сестру која води анализу. Приметити је име лекова и дозу у којој сте били прописани.

Лабораторијски тест захтева серум. Колико су материјали ваљани? Могу се складиштити мање од пет дана у температурном опсегу од 2 до 8 степени Целзијуса и више од пет дана, под условом да је температура складиштења -20 степени Целзијуса.

Испитивање крви ХЦВ је обавезно за људе са имунодефицијенцијалним стањима, нарочито ХИВ-ом.

Администрација портала категорично не препоручује самомедицину и саветује да се консултује са доктором на првим симптомима болести. На нашем порталу можете пронаћи најбоље докторе-специјалисте, на које се можете регистровати на мрежи или путем телефона. Можете сами изабрати правог лекара или ћемо га подићи апсолутно бесплатно. Такође, само када се снима кроз нас, цена консултација ће бити нижа него у самој клиници. Ово је наш мали поклон за наше посетиоце. Будите здрави!

Најбољи анти-всс

Скуп реагенса за имуно-ензимско откривање имуноглобулина класе М до вируса хепатитиса Ц.

Најбољи анти-ХЦВ ауто (комплет 1)
(За аутоматске анализоре)

Најбољи анти-ХЦВ ауто (кит 2 / Цхароите)

Скуп реагенса за имуносорбентно детекцију класе имуноглобулина Г и М на вирус хепатитиса Ц за аутоматске ЕЛИСА анализоре.

Најбољи анти-ХЦВ (комплет 1)

Најбољи анти-ХЦВ (кит 2)

Најбољи анти-ХЦВ (кит 3)

Најбољи анти-ХЦВ (комплет 4)

Скуп реагенса за имуносорбентно детекцију имуноглобулина класа Г и М до вируса хепатитиса Ц.

Скуп реагенса за имуносорбентно детекцију имуноглобулина класа Г и М појединачних протеина вируса хепатитиса Ц (језгро, НС3, НС4, НС5).

Најбољи анти-ХЦВ-потврдни тест

Скуп реагенса за имуно-ензимску потврду присуства имуноглобулина класе Г и М на хепатитис Ц вирус.

ХЦВ АГ / АТ-ИФА-БЕСТ (комплет 1)

ХЦВ АГ / АТ-ИФА-БЕСТ (комплет 2)

Сет реагенаса за детекцију имуно-ензимског антитела на вирус хепатитиса Ц и срж антигена ХЦВ.

Сет реагенаса за детекцију имуног ензима језгра антигена вируса хепатитиса Ц.

Сет реагенаса који потврђују присуство антитела на вирус хепатитиса Ц методом имунолошког блотирања.

Комплет за контролу квалитета у лабораторију ЕЛИСА "Серум који садржи антитела на вирус хепатитиса Ц".

Анти-ХЦВ контролна плоча серума

Сет серумских узорака који садрже и не садрже антитела вируса хепатитиса Ц. За интралабораторну контролу квалитета (валидацију) студија о анти-ХЦВ.

Анти-ХЦВ стандардни серумски панел

Сет серумских узорака који садрже и не садрже антитела вируса хепатитиса Ц.

Анти-вгс позитивно шта то значи

Антибодије хепатитису Ц и шта бисте требали знати о њима

Када различите иностране честице улазе у тело, као и вируси, имуни систем почиње да производи такве супстанце које се зову имуноглобулини. То су посебне ћелије које помажу тијелу да се боре против вируса. Они се зову антитела на хепатитис Ц. Шта да знам о њима?

Која су антитела на хепатитис Ц?

Таква антитела се детектују специфичним ЕЛИСА анализе или сцреенинг теста који се користи за одређивање постојања људских вирусног хепатитиса Ц. Такви антитела хепатитиса Ц постоје две класе:

- тако да се ова антитела на хепатитис Ц зову латински. У исто време, у суми, ова антитела су антитела против хепатитиса Ц.

Шта значи присуство антитела на хепатитис Ц?

Апсолутно сви пацијенти су тестирани на присуство таквих маркера да идентификују да ли имате хепатитис Ц. Ако је болест већ одвија у акутни и хронични, онда они имају антитела Анти-ХЦВ, ова антитела на хепатитис Ц могу наћи тек након 4 или 6 недеља појаве болести.

Постоје случајеви када су у присуству антитела, анти-ХЦВ укупно, људи опоравили без помоћи стручњака и независно. Ови људи имају ово тржиште и могу се наћи чак 4 до 8 година након њиховог опоравка. Чак и ако је тест анти-ХЦВ позитиван, ово још увек није довољно за правилно постављање дијагнозе. Код хроничног хепатитиса, таква антитела на хепатитис Ц се издвајају трајно, а након позитивног резултата лечења могу дуго трајати у тијелу, али њихови титри у овом случају постепено почињу да опадају.

Антибодије хепатитису Ц и шта бисте требали знати о њима?

Најважнија ствар је што морате знати да таква антитела не могу заштитити од самог развоја инфекције, а такође не могу осигурати имунитет од поновне инфекције.

Постоји још нешто попут спектра анти-ХЦВ. То су такође антитела, ипак специфична, погодна су за појединачне, и структурне и неструктурне протеине овог вируса. Њихова дефиниција је важна како би се процијенило колико је вирусно оптерећење, активност инфекције, ризик од хроничне инфекције, а такођер разликовати акутни или хронични хепатитис и колико је јетра већ погођено.

Антитела на хепатитис ц из класе ИгМ односе се на антигене овог вируса. Оне се могу одредити већ после 6, ау неким случајевима и 4 недеље одмах након инфекције, у ком случају њихова концентрација може да достигне максимум. И након завршетка овог процеса, ниво ИгМ ће почети да опада, али када се инфекција поново активира, ниво ће поново порасти. Стога се верује да су таква антитела директан знак хроничне или акутне инфекције са знаком реактивације.

ХЦВ - тест крви - шта је то?

Једна од најкомплекснијих и најшире распрострањених болести крајем прошлог века је инфекција вируса хепатитис Ц. У развијеним земљама, преваленција болести је 2%, док је укупан број пацијената широм света 500 милиона људи. Инфекција је откривена много касније од његових претходника: хепатитис А и Б - и први пут је назван "ни А нити Б инфекција". Заједно са растом зависности од дроге, број заражених људи расте сваке године. Разлог за све је начин инфекције: интравенском ињекцијом лека.

Такође, вирус се преноси током порођаја од мајке до дјетета ако је дошло до оштећења коже. Дакле, толико је важно знати, ХЦВ тест крви - шта је то? У трудноћи је потребно проћи на сваку будућу маму. Ова болест је лидер међу разлогима који захтевају трансплантацију пацијенту у јетри.

Како се развија хепатитис Ц?

Инфекција са вирусом хепатитиса Ц долази као што следи: крв болесне особе треба да уђе у крв здравог човека. Први крвни ток одваја честице вируса, растворене у здравој крви, у јетру, а затим почиње репродукција. У овом случају, људско јетра пати двоструком: с једне стране, ћелије јетре су оштећене активност вируса, с друге - људски организам почиње да се бори: шаље имуни одговор, наиме специјална-лимфоцити су ћелије које ће бити позване да уништи инфициране ћелије јетре.

Препознаје имуни систем вируса према садржају страног генетског материјала. Свако ко је ово доживео, као и неки пацијенти који су обавезни, знају шта значи тест ХЦВ крви. Да су ово веома важни индикатори како у фази откривања тако иу фази лечења, сви ће рећи, мада једног дана суочени са овим проблемом.

Када је ХЦВ анализа?

Када пацијент има притужбу на јетру, лекари обично прописују крвни тест за таквог пацијента са ХБС и ХЦВ. Да би се утврдило да ли је болест проузрокована присуством у крви вируса хепатитиса Ц или неких других морбидних стања, потребно је тестирање ХЦВ крви. Шта је овај индикатор?

Анализа открива антитела у људској крви која могу припадати једној од 2 класе:

  • Антитела на ХЦВ. Они су главни маркер. Присуство инфекције у организму се потврђује када се открије ХЦВ РНА. Ова антитела се налазе на стадијуму опоравка и такође могу бити и даље у крви још 1 до 4 године. Главни индикатор присуства хроничног хепатитиса је растућа стопа анти-ХЦВ.
  • Ниво ИгА, ИгМ, ИгГ у крвном серуму. Повећање индикатора ових маркера указује на оштећење јетре када је изложено алкохолу, са биљардном цирозом и неким другим болестима.

О чему говоре маркери?

Од тренутка добивања антигена у људско тело, тест ХЦВ крви се може открити већ 4-5 недеље. Да је вирус вируса хепатитиса Ц који се не може тачно рећи. Ови подаци су потребни да лекар донесе одлуку о потреби таквог пацијента да узима антивирусну терапију. Нарочито ако у крви има мање од 750 РНК копија по 1 мл крви, онда то указује на минимални вирусни напад.

Антибодије хепатитиса Ц увек се односе на једну од две класе - Г или М, чији подаци се нужно морају унети у тест ХЦВ крви. Објашњење објашњава ове параметре као класе имуноглобулина Г (ИгГ) и М (ИгМ). Позитивни резултат на првом маркеру још увек не указује на специфичну дијагнозу. Класа имуноглобулина Г достигне максималне вредности за 5-6 месеци од времена инфекције у телу и остаје иста код хроничног хепатитиса.

Класа имуноглобулина М се може одредити већ 1-1,5 месеци после инфекције и врло брзо достиже максималну концентрацију. Постоји још један индикатор - анти-НС3, који је са својим високим индикаторима недвосмислен рекорд присутности акутног процеса у телу.

Како донирати крв за ХЦВ анализу?

За донирање крви у лабораторији ради утврђивања присуства ХЦВ антитела, не постоје конкретна упутства. Једина препорука доктора: ограда треба изводити на празан желудац. Крв се узима из вене тестираног пацијента са шприцом за једнократну употребу.

Декодирање индикатора

Дакле, наводни пацијент је направио ХЦВ тест крви. Који су то предности и минуси у резултату? Следећа табела ће одговорити на ово.

Врсте тестова са ХЦВ

Постоје квалитативни и квантитативни тестови који одређују ХЦВ (тест крви). Шта је то?

Квантитативни тестови се примењују ако доња граница достигне 500 РНК копија по мл или 200 јединица по мл. Одредите ове тестове за ХЦВ-РНА. Мерења се извршавају двапут, јер су подаци често различити. Уз позитивне анти-ХЦВ и квантитативне тестове дају позитиван резултат у око 75% случајева. Штавише, такав резултат може се добити у скоро 95% пацијената са акутним или хроничним хепатитисом Ц. ових тестова користе у дијагностици акутних инфекција, као и имунодефицијентних пацијената код којих антитела тест буде негативан резултат, међутим, постоји сумња на присуство ХЦВ инфекције.

Квалитативни тестови су осетљивији, доња граница је 100 РНК копија по 1 мл. Користи се за утврђивање дијагнозе акутне ХЦВ инфекције праћењем крвног теста за ХЦВ. Позитивни резултат може се открити већ у прве двије седмице након инфекције. Квалитативни тест је другачији по томе што може дати лажни позитиван или лажно негативан резултат.

ХЦВ тест за крв: шта то значи и када је прописано?

Анализа крви за ХЦВ - једна од метода дијагностике вируса хепатитиса Ц Тест се утврђује када симптоми хепатитиса Ц, повишени ензими јетре, као и испитивања особа под ризиком од инфекције са вирусног хепатитиса. У другом случају, заједно са тестом крви за ХЦВ, врши се тест крви на ХБс Аг.

ХЦВ (хепатитис Ц вируса вируса хепатитиса Ц) припада породици флавивируса. Прву је открио 1988. године група истраживача из америчке компаније за биотехнологију Цхирон. ХЦВ геном је представљен молекулом РНК, тако да је стопа мутације вируса веома висока. Пронађено је да људи који су заражени вирусом хепатитиса Ц имају вирусне честице чији се геноме разликују за 1-2%. Ова карактеристика популације вируса омогућава јој успешно репродуковање упркос заштитним реакцијама људског имунитета. Разлике у геноме вируса могу утицати на ток инфекције и резултате лечења.

Према подацима Светске здравствене организације, до данас вирус ХЦВ је заразио око 150 милиона људи, сваке године вирус хепатитиса Ц изазива смрт више од 350.000 пацијената.

Методе преноса хепатитиса Ц

Вирус хепатитиса Ц се преноси са заражене крви, као што је прималац донаторске крви или органа из зараженог мајке на дете, путем сексуалног контакта, користећи не-стерилне шприцеве ​​у здравственим установама и алата за тетовирање и пирсинг салоне.

Болест се може десити у акутном облику, која траје неколико седмица и хронично, што може довести до рака или цирозе јетре.

ХЦВ-анализа крви: шта то значи у смислу имунологије?

Тест крви за ХЦВ базиран је на детекцији специфичних ИгГ и ИгМ имуноглобулина, тако да се ова врста студије понекад назива тестом анти-ХЦВ крви. Имуноглобулини су специфични протеини имунолошког система, производи се од Б-лимфоцита као одговор на откривање страних протеина у организму. Када се инфицира с вирусом хепатитиса Ц, имуноглобулини се производе за протеине протеина вируса, нуцлеоцапсид цоре протеина и неструктурираних НС протеина. Појава првих антитела на вирус се јавља не раније од 1-3 месеца након инфекције. Према откривеним антителима, лекар може одредити фазу инфекције (акутна, латентна или реактивација). Специфична антитела на хепатитис Ц могу се открити и након 10 година након обољења, али њихова концентрација је ниска и не могу се заштитити од поновне инфекције вирусом.

Интерпретација резултата анализе

  • Позитивни тест ХЦВ крви. Шта то значи? Овај резултат указује на хепатитис Ц болест у акутном или хроничном облику или раније пренесену болест.
  • Негативна ХЦВ-анализа крви. Шта то значи? У крви нема вируса хепатитиса Ц, или се инфекција недавно догодила, тако да нема антитела за то. Код неких пацијената антитела на овај вирус се уопште не производе. Овај сценарио развоја болести назива се серонегативан, то се јавља у 5% случајева.
  • ПЦР на ХЦВ РНК није показао вирус, позитиван ХЦВ тест за крв је претходно добијен. Шта то значи? Резултат теста крви за ХЦВ био је лажно позитиван, узрок тога су можда неке инфекције, неоплазме, аутоимуне болести.

ХБВ антитела откривена у крви, шта то значи?

Наталка

Антитела на вирус хепатитиса Ц (анти-ХЦВ) - инфекције са хепатитис Ц дијагностичке методе за откривање крви кроз обе класе ИгГ антитела и ИгМ (укупно специфичних антитела произведених у протеинима вируса хепатитиса Ц је ЕЛИСА-линкед иммуносорбент тесту). У норми нема антитела на вирус хепатитиса Ц у крви.
Детекција укупних антитела (анти-ХЦВ) омогућава дијагнозу хепатитиса Ц од 3-6 недеља и више након инфекције. Међутим, откривање антитела са ЕЛИСА-ом је скрининг и није довољно за дијагностификовање вируса хепатитиса Ц и захтева потврду помоћу имуноблот методе.

Јулиа

За разлику од ХБВ-а, у дијагнози којих се узимају у обзир маркери антигена и антитела, само ЕЛИСА је ухваћена са ХЦВ-ом. ХЦВ антигени, ако уђу у крв, су у количинама које практично нису заробљене. ХЦВ антигени се могу детектовати у биопсијама јетре користећи имунохистокемијске методе испитивања. Ово значајно ограничава способност процјене курса и активности инфективног процеса.
Недавно је било индиција о новом приступу индикацији ХЦВ антигена у крви. Први корак је ослобађање антигена из ћелијских структура помоћу серумске лизе, друго је заузимање антигена са специфичним моноклонским антителима. Увођење ове методе у клиничку праксу има за циљ да значајно обогати могућности дијагнозе и контроле током тока ХЦВ-а.
Анти-ХЦВ у већини (са изузетком антитела на цореАг класе М) не указују на континуирану репликацију вируса, не карактеришу његову активност, могу одговарати постинфекцији. Морамо такође сматрају да могу примаоци који су дате трансфузијом инфициране крви, бити откривена анти-ХЦВ донора са једном индикацијом није обавезно показатељ пост-трансфузијом ХЦВ инфекције. Индикација анти-ХЦВ углавном решава проблем етиолошки дијагнозе, али нису карактерисали ток инфекције (акутне, хроничне) и не решава проблем предвиђања. Код пацијената са хроничним ХЦВ-ом, анти-ХЦВ се открива у крви не само у слободном облику, већ иу саставу имунолошких комплекса који круже. Њихов садржај је релативно већи са развојем мешовитог хепатитиса ХБВ / ХЦВ.
Антибодије се формирају у сваком од вирусних протеина који се налазе у структурном и не-структуралном региону ХЦВ-а. Ово одређује њихову неједнаку специфичност и, сходно томе, различиту дијагностичку информативну вриједност индикације. За скрининг индикацију анти-ХЦВ коришћењем ЕЛИСА методу, и као потврдни тест референтног иммунноблота метод (РИБА). Први тест систем заснован на антителима указују Ц-100-3 ЕЛИСА убрзо постала широко прихваћена у клиничком, епидемиолошког праксу у избору донатора. Међутим, дозвољено је антитело у зони која је карактеристична само 12% од вирусног полипротеина, где искључиво неструктурни регион (НС3, НС4). Надаље артифициал рекомбинантни антиген С-100-3 није потпуно идентично са природним вирусних протеина који одређује њену слабу имуногеност.
Антибодије на Ц-протеин (језгро Аг) уз помоћ Ц-100-3 антигена уопће нису откривене. Све ово је унапред одредило ниску специфичност индикације анти-ХЦВ и велики број лажно негативних резултата, посебно у фази хроничног ХЦВ. Код пацијената са тешком хипергаммаглобулинемијом, напротив, тест Ц-100-3 често даје лажне позитивне резултате. Када се показују антитела на Ц-100-3, настају се посебне тешкоће приликом решавања проблема диференцијалне дијагнозе хроничног ХЦВ-а са аутоимунским хепатитисом, криоглобулинемијом и колагенозама.
Тестни системи друге генерације омогућавају снимање антитела на протеине у различитим зонама генома, не само не-структуралне, већ и структуралне регије. Њихова предност је била првенствено висока специфичност, као и могућност потпуне заступљености антигенског спектра ХЦВ. Употреба тестних система друге генерације омогућила је значајно побољшање избора донатора и смањила претњу развоја посттрансдуктивног ХЦВ-а.
Истовремено, и уз коришћење тестних система друге генерације, лажно-негативни резултати су могући, нарочито, код пацијената са ХЦВ генотиповима који су необични за овај регион. Најнапреднији тестни системи су трећа генерација.
Информатичност студија значајно се повећава када се широки спектар анти-ХЦВ свеобухватно процењује, нужно у условима динамичке контроле. Овакав систем опсервације омогућава детекцију промена односа антитела на различите ХЦВ антигене.

Евгениј Стефантсов

Код сина се открива АТ к ХЦВАг. А ХБ с Аг није детектован, може ли бити грешка. А шта је потребно предати анализу за тачну дијагнозу? Мој син није користио лек 27 година. Крв је дата 2 пута у Тамбову за ХИВ и у реци. итд. Инжавино медицинском одбору у војсци, а затим поставити такву дијагнозу.

Хепатитис Анти ХЦВ-тотал (полозхителни) Дај савјет молим!

Моја супруга и ја смо прошли тест, тестови су показали вирус хепатитиса. Имам анти-ХЦВ-тотал позитиван. Остали су негативни. И код жене. Колико је опасно колико се третира? Колико кошта? А шта је са послом, да ли је могуће радити током лечења? Осећам се одлично!

Р то

Анти-ХЦВ је присутан како у акутном (они се могу детектовати већ од 4 до 6 недеља након инфекције), и код хроничног хепатитиса. Укупно анти-ХЦВ укупно се јавља код оних који су имали хепатитис Ц и сами се опоравили. Код таквих људи, овај маркер се може открити у року од 4 до 8 година или више након опоравка. Стога, позитиван тест за анти-ХЦВ није довољан да се установи дијагноза. На позадини хроничне инфекције укупна антитела су детектована континуирано, а након успешног лечења ускладиштен дуже времена (углавном због анти-ХЦВ језгра ИгГ, писаног о њима у наставку), и њихови наслови се постепено смањује.

Екатерина Густова

Хепатитис Ц се преноси са крвљу и биолошким течностима парентералних, сексуалних и трансплаценталних путева. гроуп високог ризика чине људи који имају интравенски наркоманије, промискуитет као здравствени радници, пацијенти захтевају хемодијализу или трансфузија крви закључио. Пенетрира организам, ХЦВ улази у макрофаге крви и хепатоцита јетре, где се реплицирати. Оштећење јетре настаје углавном због имуном вируса лизу такође има директан цитопатски ефекат. Симиларити антигена вируса са антигенима система људског гена ткивне подударности доводи до аутоимуних ( "Систем") реакција. Програм ХЦВ-инфекција може појавити манифестације системског аутоимуни тироидитис, Сјогреновим синдром, идиопатска тромбоцитопенична пурпура, гломерулонефритис, реуматоидни артритис и друге успоредби с другим вирусног хепатитиса., Хепатитис Ц има мање светао клиничку слику често постаје хронична. У 20 - 50% случајева хроничног хепатитиса Ц резултате у развоју цирозе јетре и 1,25 - 2,50% - за развој хепатоцелуларног карцинома. Са високом фреквенцијом постоје аутоимуне компликације.
Желим да те узнемирим! Хепатитис Ц није лечљив, као и ХИВ инфекција! Можете живети са њим годинама! Али цироза јетре може се јавити раније или касније. Гледајте са ким радите. Нејасно је да ли ће ваша дијагноза утицати на посао. Али боље је да ваше колеге не кажу ову дијагнозу

Костарев константин

Важно је напоменути да је само око 20% људи који су једном инфицирани хепатитисом Ц способни сами да се суоче са инфекцијом. Стога, нажалост, у већини случајева присуство антитела на ХЦВ указује на хронични вирусни хепатитис Ц (ЦВХЦ).

Олга

На све наведено, додам да након откривања антитела, потребно је проћи анализу присуства вируса у крви. Ова анализа се назива ХЦВ РНА методом ПЦР, ако је позитивна, онда је неопходно генотипизирати, тј. Открити генотип вируса (зависи од тога колико времена и трошкова лечења зависи од тога). Ако сте негативни, можда сте постали један од 15-20% срећника који су се сами излечили. Али у овом случају морате пратити ситуацију и најмање једном годишње морате анализирати ПЦР.
Ако и даље постоји хепатитис, онда не бисте требали бити узнемирени. Успешно је третиран. Лечење је тешко, али можете радити ако посао није међу опасним, што захтева посебну концентрацију. У свемиру, није вредно летења)))

Скуп реагенса за имуносорбентно откривање имуноглобулина класе Г и М према појединачним протеинама вируса хепатитиса Ц (језгро, НС3, НС4, НС5) (најбољи анти-ХЦВ спектар)

Услови складиштења Скуп реагенса за имуносорбентно детекцију имуноглобулина класе Г и М за поједине протеине вируса хепатитиса Ц (језгро, НС3, НС4, НС5) (најбољи анти-ХЦВ спектар)

Чувајте ван домашаја деце.

Наручите медицинске производе у апотекама:

Оставите свој коментар

  • Комплет за прву помоћ
  • Онлине продавница
  • О нама
  • Контактирајте нас
  • Контакти издавачке куће:
  • +7 (495) 258-97-03
  • +7 (495) 258-97-06
  • Е-маил: пр@рлснет.ру
  • Адреса: Русија, 123007, Москва, ул. 5. Магистралнаиа, 12.

Ми смо у друштвеним мрежама:

© 2000-2018. РЕГИСТАР ЛЕКЦИЈА РУСИЈЕ ® РЛС ®

Сва права придржана.

Комерцијална употреба материјала није дозвољена

Информације су за здравствене раднике

Лабораторијска дијагноза хепатитиса Ц

МИ Микхаилов, Институт за епидемиологију и микробиологију. НФ Гамалеи РАМС, Москва

Када се наведе дијагноза "хепатитиса Ц", морају се размотрити сљедећи најважнији фактори:

  • показатељи активности "хепатичних" ензима;
  • присуство или одсуство маркера инфекције вирусом хепатитиса Ц (ХЦВ) и другим хепатотропним вирусима;
  • епидемиолошка историја;
  • резултати клиничког прегледа пацијента. Само свеобухватан преглед ових фактора омогућује дијагнозу ове болести са високим степеном поузданости. Лаборатори радник мора пружити објективне информације о одређивању опсега вирусних антигена и антитела, као ХЦВ РНК, омогућавајући клиничара, запосленог услуга и епидемиолога трансфузију крви да одлучи изазове са којима се суочавају. Најчешће је:
  • Идентификација особа са ХЦВ-ом за смањење хепатитиса Ц након трансфузије;
  • дијагноза и диференцијација акутног и хроничног хепатитиса Ц;
  • прогнозу болести;
  • именовање, евалуацију и прогнозу ефикасности терапије;
  • истражити ширину ХЦВ у популацији и различитим групама становништва.
    Истовремено, главна подручја рада које врши лабораторијско особље су:
  • развој и одабир најинтензивних метода за откривање маркера ХЦВ инфекције;
  • дефинисање критеријума за објективно вредновање добијених резултата;
  • развој оптималних алгоритама за обављање лабораторијских студија;
  • увођење система за побољшање откривања маркера ХЦВ инфекције.

    Основа лабораторијске дијагнозе хепатитиса Ц. ХЦВ служи знање о његову репликацију, информације о динамици појављивања и нестанка маркера инфекције, као и модерне имунохемијских и молекуларне биолошким методама за детекцију антигена, антитела и нуклеинске киселине.

    ВИРУС ХЕПАТИТИС Ц. ХЦВ је први пут идентификован 1988. године када је група истраживача на челу са М. Хоугхтоном и Цхоо К.Л, користећи нове молекуларне биолошке методе истраживања, клонирале и секвенце генома вируса [1]. Честица вируса хепатитиса Ц има сферни облик са просечним пречником од око 50 нм [2,3]. Покушаји да визуелно детектовати и проучава структуру вируса хепатитиса Ц предузетих од откривања вируса, али до сада нема постоје добро документовани Резултати ових студија, вероватно због тешкоћама акумулације вирусних честица у потребним количинама.

    ВГСединственни члан рода хепацивирус у породици Флавивиридае, која укључује вирусе попут вируса стадо приплодних бикова дијареја и свињске грознице (род Пестивирус) и жуте вируса грознице, Данг вирус и ГБ-вирус: РН-А, РН-Б и РН-Ц / ХГВ (рода Флавиви-рус). Структура вируса хепатитиса Ц може се представити на следећи начин (Схема бр. 1). Нуклеокапсид обухвата РНК хепатитиса Ц вируса нуклеокапсидног врху обложена липидног коверту увучени у њему намаз протеине које енкодира ХЦВ РНК. Вирус геном садржи линеарни једноланчани РНК молекул позитивног поларитета, дужину од око 9600 нуклеотида. Организација ХЦВ гена је слична другим флавивирусима. Она разликује две зоне које кодирају структурне и не-структуралне (функционалне) протеине. Гени који кодирају структурне протеине налазе се у 5 'региону генома вируса, а не-структурални у региону 3'. Ген ХЦВ има један отворени оквир читања (ОРФ), појединачни полипептид (приближно 3000 амино киселине), који под дејством ћелијским и вирусним протеазама исечени у структурне и структурних протеина.

    Сл. 1. Структурни елементи ХЦВ

    Структурне протеине укључују протеине кодиране Цоре, Ел и Е2 са ХЦВ РНА зонама. Она је открила три облика Ц-ХЦВ протеина: пуне дужине (п21) са моларном масом - 21 кД, скраћен (П19) и облик (П16) је детектован у нуцлеоли инфицираних хепатоцита. На својој површини, Ц-протеин носи различите високо конзервиране Б-ћелијске епитопе, чија је постојање изузетно важна за детекцију антитела на ХЦВ у току лабораторијске дијагнозе хепатитиса Ц.

    РНА региони ХЦВ-Е1 и Е2 кодирају протеине са молекулском тежином од 31 и 70 кД. Ови протеини имају неколико локација Н-гликозилације; У Е1 протеину је идентификовано до 6 таквих места, ау Е2 - 11. Информације о малом протеину, п7, пронађене су у одељку Е2, које није пронађено у структури вируса.

    Означавање регија ближе крају 3'-краја ХЦВ РНК - као зоне које носе информације о неструктурним протеинама вируса - указује на то да ови протеини нису структурне компоненте вирусне честице. У неструктурној зони, ХЦВ РНА је додијељена места означена као: НС2, НС3, НС4А, НС4Б, НС5А и НС5Б. Већина протеина кодираних не-структуралним зонама ХЦВ РНК су неопходне за репликацију вируса.

    Упоредна анализа нуклеотидних секвенци РНК изолата ХЦВ-а добијених у различитим регионима света, па чак и током обољења од истог пацијента открила је главну особину овог вируса - високу хетерогеност РНК. Положај великог генетичке варијабилности ХЦВ РНК је основа теорија да објасни: дугорочне (понекад доживотно) носилац вируса, често развој хроничних болести, тешкоће у успостављању ефикасног третмана и вакцине. Најзначајније разлике у секвенцама ХЦВ РНК су концентрисане у Н-терминалу у региону Е2, који се назива "хипервариабилни регион" (ХВР) [4].

    Тренутно постоји 6 главних генотипова и преко 100 подтипова ХЦВ. Генотипови 1а, 1б, 2а, 2б, 2ц и преко рачуна за више од 90% ХЦВ изолата добијене у Северној и Јужној Америци, Европи, Русији, Кини, Јапану и Аустралији / Новом Зеланду [5]. Генотипови 4, 5а и 6, респективно, забележени су у Централној и Јужној Африци, југоисточној Азији. У Русији и земљама ЗНД забиљежена је преваленција генотипа 16 (не мање од 68,9%) [6,7]. Верује се да пацијенти заражени генотипом 1 (посебно 1ц) реагирају лошије на третман у поређењу са пацијентима инфицираним другим генотиповима вируса.

    ХЦВ пацијента кружи као становника вирусних честица, чија генома разликују међусобно 1-2% (квазиспетсифицхности) као резултат мутација које акумулирају током инфекције и / или направљених у пацијенту током инфекције. Ови мутирани облици могу промовисати активнију репликацију или могу помоћи вирусу да избјегне имунски одговор тела и потенцијално утиче на исход акутне инфекције, разлике у току болести и реакцију на терапију интерфероном [8].

    ДЕТЕРМИНАЦИЈА АНТИ-ХЦВ. Након открића вируса ХЦВ и одређује своју улогу у развоју после трансфузије хепатитиса - "ни А ни Б" истраживачи су изазвани да развију методе способне откривања оних са ХЦВ и погодни су за постављање дијагнозе акутног и хроничног хепатитиса Ц. Утврђено је да ХЦВ антигени циркулише у изузетно ниске концентрације, а јасно је да методолошки ниво касних 80-их година КСКС века, користе за детекцију вирусни антигени је очигледно недовољна.

    Године 1989. група истраживача компаније "Цхирон Цорпоратион" под вођством К-Л.Цхоо извршила клонирање ХЦВ РНК и био имунореактивних Олигопептиди које реагују са антитела циркулишу у крви пацијената са хроничним хепатитисом "ни ни Б". Ови олигопептиди су постали основа за дијагностичке лекове за откривање антитела на ХЦВ. Ово је утврдило брз напредак у развоју и производњи дијагностичких производа. Главни метод коришћен за детекцију анти-ХЦВ је ензим-везан имуносорбент есеј као метод који испуњава услове практичне здравствене -те Висока осетљивост, специфичност и лакоћа понашања.

    С обзиром да ХЦВ опстаје у крви болесника са акутним и хроничним хепатитисом Ц у комбинацији са анти-ХЦВ дијагностичких производа фокусирају градитеље концентрисана на стварање тест система за детекцију антитела, пружа највеће могуће идентификацију носилаца вируса, а што раније дијагностиковање акутне инфекције. Разноликост антигена и антигенских детерминанти кодираних структурном и неструктурног ХЦВ РНК зони, смер одређује у дизајну дијагностичких припремама за тај аранжман и олигопептида користе за њихово креирање. Од времена откривања ХЦВ-а, створени су дијагностички системи три генерације (Табела 1).

    Табела 1
    Дијагностички лекови за откривање анти-ХЦВ [9]

    Коришћени пептиди,
    зона ХЦВ РНК у којој
    они су кодирани

    % детекција носача
    ХЦВ

    Време првог
    идентификовати
    анти-ХЦВ од
    рана жутица

    5-1-1 НС3
    Ц100-3 НС4

    Ц22-3 Цоре
    Ц200 НС3 и НС4
    НС3п НС3
    Ц 100-3 НС4

    Ц22-3 Цоре
    Ц200 НС3 и НС4
    НС3п НС3
    Пептид НС5

    Увођење додатних пептида, посебно с22-3 (Цоре), у дијагностичке препарата 2. и 3. генерације дозвољено реши главни проблем, односно повећање осетљивости, специфичност, и што је најважније, детекцију анти-ХЦВ. Захваљујући дијагностичким кривинама треће генерације, могуће је открити до 97% ХЦВ носача. Истовремено, одређена дискусија је била подстакнута увођењем пептида кодираног НС5 ХЦВ РНА регионом у дијагностикум. Према неким истраживачима, присуство овог пептида није од фундаменталне важности за побољшање квалитета дијагностичког лијека. [10,11]. Међутим, антитела на НС5 могу се открити у ранијем периоду инфекције, што побољшава квалитет лабораторијске дијагнозе акутног хепатитиса Ц. [12].

    Тренутно се користе дијагностички препарати треће генерације широм света, укључујући и у Русији. Пептиди који се користе у дијагностичким препарата добијених рекомбинантном технологијом (нпр дијагностичке компаније: "Дијагностички агенси", Низхни Новгород; "вектор", Новосибирск; "Роцхе"; "Абботт" ет ал.), Или синтетички ( 000 МЦ "Авиценна", Санкт Петербург, "Органон", итд.). Дијагностика, у којој су оба типа пептида коришћена истовремено, добила је ознаке као препарате четврте генерације. По својим карактеристикама, ови лекови немају значајне разлике. Упоредни тестови се редовно врши руског Министарства здравља, показало је сличан осетљивост дијагностичких производа домаћих и страних произвођача.

    Утврђено је да се употреба дијагностичких лекова треће генерације за откривање анти-ХЦВ међу имунокомпетентним популацијама (на примјер, донаторима крви) процјењује на 98,8-100%. Истовремено, међу имунокомпромитованим појединцима, на пример, као што су пацијенти након трансплантације бубрега, коштане сржи или особе инфициране ХИВ-ом, ова бројка је знатно нижа - 50 до 95% [12]. С.Георге ет ал. [13] показала је да 8,4% пацијената са ХИВ инфекцијом има лажно негативне резултате откривања анти-ХЦВ. А код таквих пацијената у току посматрања, може се забележити ефекат серотонверзације; регистрација позитивног резултата након серонегативног периода ХЦВ [14].

    Један од најважнијих проблема у спровођењу студија о присуству анти-ХЦВ-а је лажно позитиван резултат. Њихов изглед може бити због неспецифичне интеракције компоненти реакције, могућих унакрсних реакција са другим вирусним антигеном и многим другим факторима. Ниво лажно позитивних резултата у детекцији анти-ХЦВ са различитим дијагностичким лековима може да достигне 10-20% [15,16]. Повећан ниво таквих резултата забележен је код пацијената са онколошким и аутоимуним болестима, особама са имунодефицијенцијом и пацијентима са сифилисом [16,17]. Постојање лажних позитивних резултата доводи до задатка лабораторијског радника да их разликује од истинског откривања анти-ХЦВ. Да би се решио овај проблем, серум се детектује у крвном серуму ХЦВ РНК. Међутим, негативни резултат детекције ХЦВ РНК не дозвољава да говори о присутности лажног позитивног откривања анти-ХЦВ. Треба имати у виду да анти-ХЦВ су изоловани и циркулишу у крви пацијента који се опоравио од акутног хепатитиса Ц (10-15%) или чија елиминација ХЦВ РНК дошло као последица терапије.

    ПОТВРЂЕЊЕ (ДОДАТНИ) ТЕСТОВИ. Да би разликовали лажно позитивне узорке и узорке који заиста садрже антитела на ХЦВ, развијени су додатни (додатни) тестови. Најчешће се користи у овим тестовима имуноблот принцип [нпр - РИБА тест ( "Ортхо-Цлиницал Диагностицс"); "ЛиаТек ХЦВ" (Органон Текника)], при адсорбује на нитроцелулозну мембрану у облику појединачних трака антигени кодиран од различитих зона ХЦВ РНК. Анти-ХЦВ интеракцији са адсорбованих антигенима коришћењем антитела ензимом обележени против хуманих Иг Г својим каснијим детекцијом коришћењем супстрата комплекс. У додатним имуноблотом као додатна испитивања користе дијагностичке агенсе за детекцију анти-ХЦВ против специфичних антигена су кодирани од стране различитих зона ХЦВ РНК [ "Спецтрум 4" ( "ИмБио" Низхни Новгород, РецомбиБест АНТИ-ХЦВ-СПЕЦТРУМ "- ЗАО" Вецтор Бест ", Новосибирск, ИФА- Анти-НСО-Спектр, НПО" Дијагностички системи ", Нижниј Новгород].

    Дизајн и имплементација ових тестова је паралелан са увођењем скрининг тестове за анти-ХЦВ, понављајући принцип проширење спектра пептида користе у свакој наредној генерацији дијагностичких агенаса. Дакле, дијагностички РИБА-ИИИ се разликује од претходне генерације додавањем пептида кодираног НС5 зоном. Принципи се потврђују позитиван резултат детекције анти-ХЦВ првенствено обухватају: могућност (у неким случајевима) прецизније резултате ензимске реакције реаговањем са појединачним пептидима као примену у широком спектру ДИАГНОСТИЦУМ пептида који се не користе у тестовима. Само увођење нових пептида омогућава повећање дијагностичке вредности потврдних тестова.

    Тумачење добијених резултата, на пример, у таквом тесту као што је РИБА-ИИИ, укључује три могуће одговоре: позитиван, негативан и неограничен резултат. Последњи од њих је дат у одсуству јасних индикација (према упутству приложеном уз дијагностичког комплета), омогућавајући једно рећи нешто о присуству или одсуству анти-ХЦВ тест узорку. Корелација спектра снимљених одговора током потврдних тестова варира у зависности од карактеристика група пацијената код којих се првенствено открива анти-ХЦВ [18]. Према Ј.М. Павлотски и сар. [19], у половини случајева резултата, тумачени као "нејасан", ХЦВ РНА може бити откривена. По нашем мишљењу, легитимност одговор - "недефинисан откривање резултат анти-ХЦВ", издат од стране особља лекар лабораторијске, евидентно не само у потврдног теста, а рутинске прегледе на присуство анти-ХЦВ. Нужност таквог тумачења добијених резултата је одраз тренутног стања лабораторијске дијагнозе хепатитиса Ц.

    ДЕТЕРМИНАЦИЈА ИгМ АНТИ-ХЦВ. Тренутно су направљени и произведени дијагностички сетови за откривање ИгМ анти-ХЦВ компаније: "Вецтор Бест"; "Дијагностички системи"; "Имбио", "Абботт" итд. У фази пројектовања дијагностичких сетова развијени су ЕЛИСА комплети, базирани на пептидима кодираним различитим регионима ХЦВ РНК [20]. Избор је заустављен на пептиду кодираном Цоре регионом ХЦВ РНК и откривањем ИгМ антитела на њега. Као и код испитивања за откривање анти-ХЦВ (ИгГ), лажно-позитивни резултати могу бити забележени у проучавању ИгМ анти-ХЦВ. Према Стевенсони Д.Л. са ет ал. [21], до 70% пацијената са хроничним хепатитисом Ц са присуством ИгМ анти-ХЦВ истовремено имало је повишени ниво реуматоидног фактора, што доприноси појављивању лажних позитивних резултата. Истовремено, према Павлотски Ј.М., присуство реуматоидног фактора не утиче на квалитет детекције ИгМ анти-ХЦВ [22].

    ДЕТЕРМИНАЦИЈА АНТИГЕНА ХЦВ. Могућност одређивања ХЦВ антигена привукла је пажњу истраживача одмах након откривања вируса. Теоријска могућност њиховог тестирања је показана Кравцзински К. ет ал [23] открио да имунохистохемије у ткиву јетре ХЦВ антигена, демонстрирајући специфичност имунофлуоресценције сјаја. Употреба поли- и моноклоналних антитела разним ХЦВ антигена је утврдила присуство ХЦВ језгра Аг, антигене кодиране НС3 и НС4 зоне ХЦВ РНК у језгру и цитоплазми хепатоцита, у 60-90% болесника са хроничном ХС [24].Међутим, даљња истраживања су показала да антигени ХЦВ могу се открити у мање од 5% ћелија јетре.

    Први дијагностички тест системи ( "Ортхо антитела за Цоре Антиген (мишјих моноклоналних) ЕЛ1СА тест систем" и "Имуцхецк Ф-ХЦВ Аг Цоре Кокусаи") за детекцију ХЦВ антигена појавила на тржишту имунолошких производа у 1999. Као циљ је изабран Цоре детекцију ХЦВ антиген, који се утврђује чврстој фази ЕЛИСА реализацији конструисан на основу моноклоналних антитела. Прве студије о примени ових испитивања су идентификовали своју високу осетљивост, специфичност и обећавајуће апликације, првенствено у служби трансфузије крви [25,26]. Инсталиран:

  • могућност утврђивања језгре Аг ХЦВ у серуму или плазми;
  • специфичност детекције сржи ХЦВ Цоре Аг;
  • присуство особа са циркулационим антигеном у серонегативној крви за анти-ХЦВ;
  • честа (90,3%) детекција Цоре Аг ХЦВ у крвном серуму са присуством анти-ХЦВ и ХЦВ РНК [25];
  • директна корелација између концентрације ХЦВ РНК и детекције сржи АгВ ХЦВ [25];
  • смањујући фазу "прозора" - од тренутка инфекције до првог позитивног резултата откривања анти-ХЦВ. Утврђено је ХЦВ Цоре Аг могуће утврдити 83% случајева (н = 24) је сутрадан после првог откривања ХЦВ РНК [26], и дуге (у просеку 26 дана) пре појаве анти-ХЦВ [27].

    МЕТОДЕ ОДРЕЂИВАЊА РНК ХЦВ. Модерна фаза лабораторијске дијагностике хепатитиса Ц може се окарактерисати као фаза почетка широке примене молекуларних биолошких метода за детекцију ХЦВ РНК. Највећа већина метода за детекцију нуклеинских киселина је тестирана на детекцију ХЦВ РНК. Принципи конструисања дијагностичких препарата и њихова употреба за откривање вирусне ДНК или РНК посвећени су значајном броју прегледа литературе објављених како у домаћим [28] тако иу иностраним публикацијама [29]. Све ове методе могу се поделити у две групе, које су засноване на примени принципа хибридизације без амплификације праћених сегмента нуклеинске киселине или уз амплификацију која може значајно побољшати резолуцију метода.

    Метода хибридизације на основу комбинације сонди означених хибридизацијом (генетски конструисане или синтетичке молекулске структуре које садрже нуклеотидне секвенце комплементарне одабраним РНК локалима). Резултати се узимају у обзир интензитет сигнала који долази од ознаке у композицији формираног комплекса.

    Код хепатитиса Ц, овај метод откривања ХЦВ РНК првенствено је пронашао апликацију за идентификацију директно у хепатоцитима, у тестовима означеним као ин ситу хибидизацију [30]. Могућност директног откривања ХЦВ РНК у ткивима омогућила је откривање у ћелијама мононуклеарних крвних ћелија, ћелијама жлезда и другим ткивима пацијента са хепатитисом Ц [31, 32].

    Метода хибридизације која се користи за откривање ХЦВ РНК омогућава да се покаже присуство негативних (репликативних) ланаца ХЦВ РНК, што указује на активну репликацију вируса [33].

    Метода полимеразне ланчане реакције - тренутно најчешће коришћена методичка метода, која је основа готово свих молекуларних биолошких метода детекције ХЦВ РНК. Штавише, одређивање ХЦВ РНК је могуће иу квалитативним и квантитативним верзијама, што је посебно важно за постављање, праћење и процену ефективности коришћене терапије.

    Главне варијанте методе могу се идентификовати на следећи начин:

  • полимеразна ланчана реакција (ПЦР);
  • лигазна ланчана реакција;
  • НАСБА;
  • ТМА (транскрипцијска амплификована реакција амплификације, амплификација посредована транспипацијом).

    Полимеразна ланчана реакција - који се широко користи у начину откривања ХЦВ РНК како у Русији, тако иу иностранству. Заснован је на вишеквалитетном процесу, који подсећа на природну репликацију нуклеинске киселине, сваки циклус који се састоји од неколико фаза.

    Из студираног материјала (серум или плазма крви, биопсија јетре), ХЦВ РНА се ослобађа. С обзиром да је нуклеинска киселина ХЦВ-а представљена РНК, а за амплификацију је потребан молекул цДНК, ензимом-реверзном транскриптазом, формирају се једноручни молекули ХЦВ цДНК. У следећем кораку, тзв. "ЦДНА" се додаје у одређени део сваког од ланаца ХЦВ цДНК. Примери - кратки олигонуклеотиди, комплементарни са познатим нуклеотидним секвенцама. Поређење примарне структуре региона 5'УТР геномом различитих ХЦВ изолата открило је своју безначајну варијабилност (између генотипова, хомологије нуклеотида - 92-98%, и унутар генотипа 98-99%). Овим је било пожељно одабрати прајмере из ове зоне ХЦВ РНК и њихове употребе у дијагностичким тестним системима произведеним у нашој земљи и иностранству.

    Даље, уз помоћ ДНА-зависног ДНА полимеразног ензима, синтетишу се нови ДНК одељци. Тренутно, извор овог ензима најчешће користе тхермопхилус термус бактерије (Ттх-полимеразе) или тхермопхилус акуатицус (Так-полимераза). Са термичке стабилности у присуству мангана и магнезијума јона, ензим може истовремено користити за синтезу комплементарних једноланчана молекула ХЦВ цДНК и амплификације одабране порције цДНК. У завршној фази јединственог реакционог циклуса, синтеза ДНК синтетизира нове ланце комплементарних ХЦВ цДНК. Вишеструки понављања реакционе циклуса који води до акумулације ХЦВ цДНК фрагмената, који се може регистрована помоћу полиакриламид гел електрофорезе следе визуелну детекцију или преко хибридизацију са олигонуклеотидних проба, што повећава осетљивост и специфичност дијагностичких производа користе. Употреба прајмера означених ензимима омогућава снимање резултата ПЦР-а користећи имуноассаи ензима.

    Стални циљ истраживача који дизајнирају дијагностичке системе за откривање ХЦВ РНК је повећање осетљивости и специфичности. Ова сврха служи варијанта ПЦР, означена као "уграђени ПЦР" [34]. Посебна карактеристика овог метода из "класичног" је истовремена употреба два пара прајмера, од којих је једна комплементарно повезана са унутрашњим подручјем ампликона добијеним након прве рунде амплификације. У исто време, верује се да ова варијанта ПЦР-а има већи ризик од контаминације узорака, што може довести до лажних позитивних резултата [35].

    Акутна потреба за одређивање ХЦВ РНК и сложености повезане са великом производњом високо осетљивих и специфичних дијагностичких сетова за ПЦР дијагностику утврдиле су широку употребу лекова произведених у научним лабораторијама. Упоређивање ових тестних система, такозваних "ин-хоусе" тестова, показало је њихову високу варијабилност у осетљивости и специфичности, као и недостатак репродуктивности резултата између лабораторија и серије дијагностичких лекова. На пример, у првом европском кругу "екстерних" контрола квалитета контроле откривања ХЦВ РНК (1996), од укупно 136 лабораторија, само 22 (16%) су успјели правилно одредити присуство или одсуство вирусне РНК у датим контролним узорцима [36]. Сличан резултат је забиљежен у нашој земљи током сличног рада у оквиру Федералног система контроле спољног квалитета (2001), када су само 3 од 14 лабораторија (21,4%) које су учествовале (21,4%) успјеле правилно ријешити задатак [37].

    Узроци лажно-негативних и лажно позитивних резултата детекције ХЦВ РНК су различити. Са лажно негативним резултатима:
    - губитак или уништавање ХЦВ РНК у припреми за одговор клиничког материјала;
    - присуство у узорку инхибитора који утичу на различите компоненте ПЦР-а. Ови инхибитори су представљени разним хемијским или протеинским супстанцама. На пример: присуство инхибитора реверзне транскриптазе у течности сперме није омогућило откривање ХЦВ РНК и говорећи о могућности примене сексуалног пута преноса хепатитиса Ц [38]; присуство хепаприна [39]; висок ниво криоглобулина у серуму крви [40];
    - непоштовање термичког режима складиштења и транспорта клиничког материјала. Са лажним позитивним резултатима:
    - контаминација између узорака (при обради узорака и / или рад са реакционом смешом), укључујући контаминацију са позитивним контролним узорком;
    - контаминација од производа пре амплификације (амплицонс) који могу контаминирати узорке и решења теста помоћу аеросола или лабораторијске опреме.

    Масовно увођење ПЦР дијагностике по дефиницији РНК ХЦВ-а поставило је тела практичне здравствене заштите задатак преласка на нови ниво спровођења лабораторијских студија. Изолација изолованих зона за главне фазе ПЦР (за припрему узорка, појачање, узимајући у обзир резултате); Одвојени комплет за сваку фазу реакције лабораторијске одеће, аутоматске пипете; постојање стандардних дијагностичких сетова и, што је најважније, доступност висококвалификованог лабораторијског особља омогућава смањење нивоа лажних резултата.

    Оригин стандардизовани сет за ХЦВ РНК ( "АмплицорТМ ХЦВ", "Роцхе Дијагностички системи") произведен у 1993. години. Током година развијени су комплети за откривање ХЦВ РНК, чија је главна сврха била повећање њихове осјетљивости и специфичности. Приликом дизајнирања "Амплицор ТМ ХЦВ" користи неколико оригиналних методолошке техника омогућавају да открије или изнад 100 копија ХЦВ РНК по мл., Као да се баве могућим случајевима контаминације узорака и рјешења користе у сету. Коришћењем ензима - амперази и дезиксиуридинтрифосфата (дУТП) омогућава уништи у првом амплификације циклуса претходном апликони које могу настати контаминације. Деструцтион амперази касно у првом амплификације циклуса (на 55 ° Ц) не дозвољава да ензим уништи амплицонс изабране као мета. Важна иновација била је увођење интерне контроле. Значење ове иновације састоји у увођењу узорка у свакој секвенци тог умнозене ХЦВ РНК дела који потом детектује применом одговарајућих прајмера у реакцији амплификације у истом режиму. Одсуство позитивне реакције у детекцији унутрашње контроле сугерише лажно негативну реакцију на присуство ХЦВ РНК у узорку. Диагностицум следеће генерације лек одређен - "ХЦВ Амплицор 2,0", када се користи ограничење осетљивости која 50 молекуле РНК ХЦВ.

    Систем ХЦВ РНК, користећи "Роцхе" комплета компаније не могу да се посматрати изоловано од своје инструменте, одређује висок квалитет тестирања. Програмери ове методе настојали су да у потпуности аутоматизују све фазе реакције. Оличење ове идеје био је систем "ЦОБАСАмплиПрепТМ", који омогућава да у потпуности аутоматизује процес екстракције ХЦВ РНК, амплификацију и детекцију, чиме се смањује ризик од лажно позитивних и лажно негативни, одржавајући високу осетљивост и специфичност [41].

    Лигасе ланчана реакција детекције РНА БГЦ. (ЛЦР). Метода се заснива на способности ензима "ДНК-зависна ДНК лигаза" да цросслинк (лигат) прекида фосфодиестарску везу у ДНК у присуству АТП и Мг 2+ јона. Као и код "класичног" ПЦР-а за откривање ХЦВ РНК, прва фаза ЛЦР-а је реверзна транскрипција ради добијања ХЦВ цДНК. Надаље, ДНК лигаза везује два пара прајмера (комплементарно са 5 'некодираног ХЦВ РНК региона), који су даље појачани. Детекција ЛЦР амплификационих производа врши се узимањем у обзир реакције антиген-антитела. Сваки од два прајмера је означен различитим хаптеном. Прва од њих је заробљена антителима адсорбована на микрочестице. Након процедури прања користећи други пар антитела обележених са флуоресцентном етикетом је њихова селективна интеракција са хаптеном у амплификације производу, праћено реакцијом подлогу и на рачун флуориметру.

    Сензитивност ове методе је око 200 копија ХЦВ РНК у мл, што омогућава да се користи за рјешавање различитих клиничких и дијагностичких проблема [42]. Тренутно, дијагностички сетови за детекцију ХЦВ РНК, засновани на ЛЦР, производе Абботт.

    Нуклеинске киселине Сеакуенценце амплификација - НАСБА -ХЦВ метода детекције РНК се заснива на истовременом дејству три ензима: реверзне транскриптазе вируса миелобластоми птице, РНКзом Х и Т7 РНК полимеразе [43]. За разлику од РТ ПЦР-а, реверзна транскрипција ХЦВ РНК се не изводи у првој фази. Уз помоћ ензима који се користе, више од 10 (9) копија ХЦВ цДНК странице се може добити у року од 90 минута [44]. Способност реализације реакције на ниским температурама (+41 Ц) знатно поједностављује рад и омогућава напуштање опреме која обезбеђује цикличне промене на високим температурама. Резултати реакције се узимају у обзир електрохемилуминисценцијом. Упркос чињеници да је осјетљивост НАСБА близу РТ ПЦР, ова метода није широко кориштена за откривање ХЦВ РНК. Тренутно се развија варијанта методе која комбинује принципе НАСБА и "Реал РТ РТ ПЦР".

    Метода транзиције-посредоване амплификације (ТМА) разликује се од ПЦР и ЛЦР првенствено у томе што су фрагменти ХЦВ РНК директно појачани, а не ХЦВ цДНА. У почетној фази реакције, прајмер (број 1) је повезан са ХЦВ РНК и копија циљног молекула, цДНА, се синтетизује уз помоћ ензима (реверзна транскриптаза). Реверсна транскриптаза, која такође има активност РНасе-Х, уништава вирусну РНК у хибриду РНК-цДНК. Затим, други пример се припрема за молекул цДНК, након чега следи завршетак двоструке ДНА са реверзном транскриптазом. Користећи други ензим, јавља се РНА полимераза, транскрипција РНК са цДНК, што резултира стварањем 100 до 1000 примерака ампликона ХЦВ РНК у једном реакционом циклусу. Пример бр. 2 је повезан са овим РНА-апиконима уз даљу синтезу копија цДНК и уништавање молекула РНК. Додавање прајмера бр. 1 у цДНК, праћено завршетком двоструке ДНА, покреће следећи циклус амплификације. Резултати реакције се узимају у обзир на луменометру, пошто формирани ампликони РНК специфично комуницирају са сондама ДНА означеним хемилуминапхоресима.

    Као предности ТМА методе при откривању ХЦВ РНК, примећује се:

  • реакција на нижим температурама у поређењу са ПЦР;
  • формирање већег броја ампликона у једном реакционом циклусу, што смањује време потребно за добијање коначног резултата (30-40 минута) и повећава осетљивост реакције (50 копија / мл) [45].
  • смањујући ризик од контаминације, јер је РНА мање стабилна од ДНК.

    Компаративне студије о детекцији ХЦВ РНК од стране ТМА и других метода показале су висок степен коинциденције резултата [45].

    Комбинација принципа хибридизације и амплификације лежи у методи откривања ХЦВ РНК, означеног као "Метода хибридизације коришћењем разгранатих сонди или раздвојеног ДНК теста (бДНА) [46]. За разлику од ПЦР-а у овом тесту, амплификација не укључује молекуле ХЦВ цДНК, већ од сигнала. Реакција се изводи у 96 базенчића, у којима су адсорбованих фрагменти ХЦВ РНК из 5 'нетранслираног региона и језгра-гена ХЦВ РНК. Због накнадно везивање са синтетичким ДНК молекула разгранате и хибридизацијом са пробом обележе са алкалне фосфатазе појачалом и накнадну ензимске реакције се постиже наглим порастом примљеног сигнала. Тренутно постоје диагностицумс трећу генерацију тржишта дијагностички (Баиер 3.0 Хепати-тис Ц Вирус РНА квантитативног Брна) има осетљивост за идентификацију 520 ИУ / мл (2500 примерка ХЦВ РНК).

    КВАНТИТАТИВНА ДЕТЕКЦИЈА ХЦВ РНК. Квантитативна варијанта ПЦР-а се користи за процену концентрације ХЦВ РНК. У почетку, концентрација ХЦВ РНК покушала да окарактерише редних вредности, као што су "+", "++", итд, визуелно одражава интензитет бендова добијених електрофорезе амплификације производа или ограничавањем разблажења, односно присуством позитивног резултата у финалу титрациона тачка. Тешкоће стандардизује сви ПЦР кораци не дозвољавају објективну процену концентрације ХЦВ РНК, што доводи до значајних грешака тумачењу резултата.

    Тренутно, резултати истраживања изражени у квантитативном смислу: број копија ХЦВ РНК садржаних у 1 мЛ, у апсолутном смислу, или логарифметицхеском (лог 10).. На основу чињенице да је концентрација ХЦВ РНК детектованог одражава број вирусних честица, ова цифра се назива "вируса еквивалент (ЕК)", уз додатак префикс к (кило хиљада) или М (ппм). Други начин да се изрази број честица вируса су њихови тјелесни еквиваленти. На пример, у грамима или пицограмима (1 пг одговара око 1 милион ек). Разноликост примењених количина отежава интерпретацију резултата добијених у различитим лабораторијама. Стога, ВХО Екперт Цоммиттее он Биологицал стандардизацији учинило "међународну референтни материјал" садржи ХЦВ РНК (лиофилновисусхеннаиа крвни серум који садржи ХЦВ РНК генотип 1), концентрација која се изражава у интернационалним јединицама (ИУ / мл) [47]. Посебни фактори омогућавају нам да поново израчунамо вредности добијене концентрације у међународне јединице.

    Скоро све варијанте ПЦР-а се користе за одређивање концентрације ХЦВ РНК. При чему дијагностичке формулације да испуне низ специфичних захтева, од којих је најважнија строга резултати линеарност, тј повећање сигнала откривене реакције са повећањем концентрације ХЦВ РНК у тест узорку. Употреба интерних стандарда са различитим садржајем ХЦВ РНК избјегава многе методолошке грешке које могу утјецати на крајњи резултат реакције [28]. Осетљивост примењено дијагностику (Амплицор ХЦВ Монитор в2.0; ЛЦк ХЦВ РНК Куантитативе Ассаи) може детектовати ХЦВ РНК са почетком у 50 копија по мл [48.49], што је посебно важно за предвиђање ефикасности антивирусне терапије одабране.

    ПЦР у реалном времену ("Реал РТ РТ ПЦР") -једна од најперспективнијих опција за квантитативну методу за детекцију ХЦВ РНК. Метод и његов хардвер заједнички су развили стручњаци Роцхеа и Перчина Елмера. Принцип методе је способност хидролизе цДНА секвенце у правцу 5 '---- 3'. У реакцији се користи посебна сонда, означена са две флуоресцентне боје са блиском апсорпцијом и макима флуоресценције. У присуству производа за амплификацију Таг-полимераза цепи сонду, која спречава пренос енергије из једног молекула боје на другу, и на тај начин спречава ослобађање кванта светлости. Посебан уређај узима у обзир реакцију и математичко моделирање флуоресцентне кинетике у свакој фази реакције, што омогућава добијање информација о почетној концентрацији ХЦВ РНК.

    Сматра што чини разлику у "реалном времену ПЦР" могуће добити информације о присутности ХЦВ РНК директно током реакције, чиме се смањује време теста у комбинацији са високом осетљивошћу и линеарност резултата [50]. Према Татјании Иасхина и коаутори, ова метода дозвољава детекцију од 200 копија ХЦВ РНК у мл. [51].

    МЕТОДЕ ГЕНОТИПИРАЊА РНА ВХЦ. Одређивање припадности ХЦВ одређеном генотипу и подтипу нашла је своју примјену за рјешавање не само чисто научних, већ и практичних питања. На пример: тражење извора инфекције током епидемија хепатитиса Ц или предвиђање ефективности коришћене терапије.

    "Златни стандард" генотипизације ХЦВ-а је директно одређивање примарне структуре ХЦВ РНК са његовом накнадном филогенетском анализом [52], што омогућава да се овај изолат вируса јасно карактерише. Можете добити ове информације користећи следеће опције секвенцирања:

  • директан;
  • на основу стандардног клонирања;
  • секвенцирање производа ПЦР реакције (ограничено секвенцирање).
    Упркос тачности резултата, метод директне секвенце се не користи у практичној здравственој заштити због техничких потешкоћа у спровођењу истраживања и високих трошкова рада. Истовремено, доступност информација о примарној структури ХЦВ РНК је референтна метода генотипизације, а доступност аутоматских уређаја за секвенцирање поједностављује резултате.

    Тренутно, у већини случајева, за генотипизацију ХЦВ РНК користе се методе базиране на употреби ПЦР-а са прајмерима специфичним за тип. Прво генотипизовање ХЦВ РНК извршио је Н. Окамото и други. У 1992. години са РТ-ПЦР [53], који укључује два корака амплификације. Први је изведен са универзалним прајмерима за све генотипове ХЦВ-а, други са мешавином специфичних прајмера за добијање специфичних производа за амплификацију различитих дужина. Присуство одређеног генотипа оцењено је по величини амплификованог производа. Као прајмери ​​се користе специфичне сонде типа, информације о којима се налазе у 5'УТР, Цоре или НС5 регионима РНКВС [54].

    Хибридизација појачан производа са сондама генских специфичан апсорбовани (од 5 'нетранслираном региону ХЦВ РНК), адсорбује на нитроцелулозну мембрану, лежи у основи теста - означен "ИННО-ЛиПА ХЦВ, ИННО-Генетицс" [55]. На почетку помоћу овог теста могуће је уобличити генотипове: ла; лб; 2а; 2б; 3а; 3б; 4 и 5а. Затим тест систем 2нд генератион "ИННО-ЛиПА ХЦВ ИИ, Инногенетицс" дозволи да разликује све генотипове 6 и даљи 2Ц; 2д; 2и; 3ц; 4а-х; 6а и 10а. [56]

    Методолошки арсенал генотипизације ХЦВ није ограничен на горе наведене методе и обухвата низ различитих метода:

  • генотипизација заснована на анализи ограничених профила амплификованих производа (РФЛП). Производи амплификације фрагмената ХЦВ РНК (5'УТР-регион или НС5 ХЦВ РНА регион) разблажују рестрикционим ензимима. Формирани фрагменти варирају у дужини, у зависности од мјеста ограничења у оквиру кога се одвајају. Резултати електрофорезе и њихова упоређивања омогућавају идентификацију ХЦВ генотипа у тестном узорку [57]. Поређење резултата генотипизације помоћу методе ПЦР-РФЛП са секвенционим подацима показало је висок степен коинциденције резултата - 95% [58].
  • генотипизација заснована на ССЦП методи (процена конформационог полиморфизма једноручних фрагмената ДНК). 5-непреведени регион ХЦВ РНК, који има минималан скуп нуклеотидних варијација који разликују генотипове једни од других, изабран је као предмет истраживања. Ова чињеница одређује могућност примене заједничких прајмера за генотипизацију [59].

    СЕРОТИПИРАЊЕ Анти-ХЦВ Истраживање је омогућен захваљујући П.Симмондс ет ал, утврђивање присуства антитела усмерених на епитопе генотипспетсифицхним које информације кодиране НС4 ХЦВ РНК зоне [60]. Са диагностицум за ЕЛИСА граде на бази синтетичких пептида, способан да диференцира случајева хепатитиса Ц, изазване вирусима 1, 2 и генотип 3 (89% поклапају са резултатима генотип). Девелопмент тестсистем користе синтетске и рекомбинантних антигене кодиране од стране НС4 и Основним зонама ХЦВ РНК енханцед лист типеабле варијанте вируса и подтипове експерт присутности (1а, лб, 2а, 2б, Овер и 4а) [61,62]. Тренутно комерцијални издање дијагностичких препарата за серотипинг у извођењу спот ЕЛИСА - "НА Мурех 1-6 Серотипинг тесту Мурек Дијагностика", ау извођењу "имуноблотом" - РИБА ХЦВ Серотипинг испитивању, Цхирон Диагностицс. Упоредни подаци о серотипизацији и генотипизацији ХЦВ РНК показали су висок ниво коинциденције резултата, достигавши 95% [62].

    Серотипизација анти-ХЦВ у поређењу са генотипизацијом ХЦВ РНК има такве предности као што су једноставност реакције и нижи трошкови. Истовремено, ова метода у сваком случају не може заменити генотипизацију. Резултати серотипизације анти-ХЦВ-а сведоче о типу анти-ХЦВ у тренутној или претходно пренесеној инфекцији. У неким случајевима (најчешће код пацијената са хемофилијом) забележено је истовремено детекцију анти-ХЦВ различитих подтипова, што може указати на вишеструку инфекцију са различитим подтиповима и генотиповима ХЦВ [63]. Поред тога, код пацијената са хепатитисом Ц на позадини израженог стања имунодефицијенције, РНА може бити једини маркер, што онемогућава извођење серотипа.

    ДЕТЕКЦИЈА И ТРАЦИЈА РЕЗУЛТАТА ТЕСТИРАЊА СЕРОЛОШКИХ МАРКЕРА ХЦВ-ИНФЕКЦИЈЕ. Широк спектар серолошких маркера текућег или претходног ХЦВ инфекције, као модерног методолошког оквира може да реши многе проблеме у лабораторијској дијагностици и превенцији хепатитиса Ц. Табела 2 показује број серолошких маркера ХЦВ инфекције и најзначајније области њиховог тестирања.

    Табела 2
    Дијагностички значај маркера тренутне или претходне ХЦВ инфекције

    Сцреенинг
    у служби
    крв

    Потврда
    тхе
    резултат
    + анти-ХЦВ

    Један од главних задатака лабораторијске дијагнозе хепатитиса Ц јесте дијагноза и одвајање акутне од хроничног хепатитиса Ц идентификовањем серолошких маркера инфекције. Као и код других акутних вирусних хепатитиса, серолошки маркери ХЦВ инфекције доследно се појављују и нестају током тока инфекције и процес опоравка (Слика 2).

    ХЦВ РНА се може открити 7-21 дана након ХЦВ инфекције и анти-ХЦВ на дан 20 до 150 (у просјеку, 50. дан) [64]. Спектар анти-ХЦВ може се разликовати у зависности од периода акутног хепатитиса. Верује се да први који откривају антитела кодирана Цоре и НС5 регионом ХЦВ РНК. Анти-ХЦВ протеини кодирани са НС4 зоном нису присутни у акутној фази хепатитиса Ц [65]. Компаративна студија нивоа концентрација анти-ХЦВ, спектра анти-ХЦВ и ХЦВ РНК код пацијената са акутним и хроничним хепатитисом показала је неке разлике [66]. По нашем мишљењу, ове разлике могу бити повезане са индивидуалним карактеристикама заразног процеса, што смањује њихову дијагностичку вриједност.

    Сл. 2. Акутни хепатитис Ц

    По аналогији са лабораторијску дијагностику хепатитиса А и Б се очекује антитела на ХЦВ ИгМ класе ће бити велик као дијагностичку вредност ИгМ анти-ХАВ и ИгМ анти-ХБЦ. Међутим, они тест серуми болесника са акутним и хроничним хепатитисом Ц у присуству ИгМ анти-ХЦВ искажу своју честе идентификацију код ових пацијената - 50-93% и 50-70%, респективно [67,68], ови резултати показују да откривање ИгМ анти -ХЦВ не може се користити као маркер акутне ХЦВ инфекције.

    Одсуство маркера који тврди да је "златни" стандард акутног хепатитиса Ц одређује потребу за свеобухватном оцјеном добијених резултата на основу динамичког посматрања пацијента.

    Једнако важна област употребе високо осетљивих метода за тестирање ХЦВ РНК - смањење ризика посттрансфузионог хепатитиса Ц. Потреба за таквим радовима одређује присуство фазе "прозора", тј. време између прве детекције ХЦВ РНК и појављивања анти-ХЦВ, као и постојање донатора крви (пацијенти са хроничним хепатитисом Ц) који имају ХЦВ РНК у одсуству анти-ХЦВ. Садашњи систем праћења крвних донација за ХЦВ укључује само тестирање анти-ХЦВ-а, ризик од настанка хепатитиса Ц се наставља. Полазећи од овога, легитимно је поставити питање тестирања крви за присуство ХЦВ РНК савременим методама (НАТ методе су "тест амплификације нуклеинске киселине"). Фактор који ограничава овај рад је висока цена истраживања. Да би се смањили трошкови, препоручује се тестирање базена серума крви (од 8 до 96 узорака) уз накнадно потраживање позитивног узорка у случају откривања ХЦВ РНК у базену серума. Узимајући у обзир фактор разблаживања жељене ХЦВ РНК када су крвни серуми надувани, питање примјене најсензибилнијих метода детекције постаје од главне важности. Сматра се да употреба дијагностичких комплета за НАТ - са сензитивношћу од 50-100 ИУ / мЛ може значајно смањити ризик од посттрансфузијског хепатитиса Ц.

    Без сумње, списак проблема који се могу решити приликом тестирања читавог спектра маркера ХЦВ инфекције није ограничен на ова два подручја. Доступност модерних метода испитивања у комбинацији с познавањем њихових способности отвара широке перспективе за научно и примењено истраживање о хепатитису Ц.


  • Повезани Чланци Хепатитис