Лабораторијска дијагностика вирусног хепатитиса Ц, Б, А

Share Tweet Pin it

Вирусни хепатитис је заразна инфламаторна болест јетре, најчешћа патологија међу другим јетрним лезијама. У зависности од врсте вирусног хепатитиса, дијагноза болести се заснива на клиничким симптомима и лабораторијским тестовима. Пажљиво истражена медицинска историја и епидемиолошка историја играју важну улогу. Постоји неколико облика вирусног хепатитиса у споља Екцитер различитим клиничким манифестацијама, току и тежини болести. Лабораторијска дијагноза виралног хепатитиса у многим случајевима је једина метода која вам омогућава да тачно утврдите болест. Тренутно идентификовани и студирао неколико врста вируса са хепатотропни деловања (А, Б, Ц, Д, Е) које изазивају сличну клиничку слику. Због ниског степена и тешке дијагнозе хепатитиса Ц, сматра се да је најтежа од свих познатих врста.

Вирусни хепатитис А

Има фекално-орални пут преноса, што га чини широко распрострањеном инфекцијом. Дијагноза хепатитиса А није веома тешка. Период инкубације је релативно кратак - од 7 до 50 дана; карактерише оштар почетак: постоји висока грозница, наглашени астенични синдром, бол у свим зглобовима - клинички подсећа на грип. Трајање болести - 1 месец. Благи ток болести понекад не захтева посебне терапеутске мјере, постоје случајеви самозадовољивања.

Вирусни хепатитис Б

За субклинички ток, лабораторијска дијагноза хепатитиса Б је једина тачна метода за верификацију дијагнозе - вирус одређује антиген вируса и антитела на екситрични протеин, као и ХБВ ДНК. Путеви преноса:

  • парентерално - кроз крв;
  • сексуално - преко сперме;
  • вертикално: од мајке до фетуса (преко материног млека, вирус се не преносе на дете).

Инфекција се унесе када се користи прљаве игле (једна игла зависници користе) кроз алате (у случају хируршких интервенција, тетовирања, Акупунктура, ухо пирсинг, маникир, педикир), у трансфузија крви. Латентни период је од 2 месеца до 6 месеци. Симптоми подсећа на почетку вирусног хепатитиса А: симптоме сличне грипу, болови се појављују по целом телу и зглобовима, тешке слабости, малаксалости. Понекад има осипа. Прогноза акутног хепатитиса је релативно повољна: у 80% случајева опоравак се јавља. Субклинички облик болести често стиче хронични ток - у таквим случајевима је ретко могуће постићи потпуни лек.

Истовремено у многим случајевима, болест одређује сателита хепатитиса Б - Д вирус (делта), што изазива вирусну хепатитиса Д и отежавајуће за основну болест.

Вирусни хепатитис Е на клиничким симптомима подсећа на ХАВ, али има постепени почетак и много је опаснији за труднице.

Манифестације ХЦВ

Лабораторијска дијагноза хепатитиса Ц (ХЦВ) у лабораторији је нарочито важна, јер она утиче на око 3% светске популације. Сваке године повећава се инциденца - ово је повезано са сталним повећањем зависности од дроге у свету.

Пажљиво молим! Вирусни хепатитис Ц је један од најопаснијих и најтежих међу познатим облицима заразног оштећења јетре. Он се зове "нежни убица" због субклиничког тока већ дуго времена, а затим брзи исход у цирози са могућим фаталним исходом. Комбинација ХЦВ са другим облицима инфективног хепатитиса значајно повећава ток болести и убрзава фатални исход.

Акутни ХЦВ је асимптоматски, тако да се ретко дијагностикује. Ако је могуће идентификовати болест у овој фази, онда с правовременим почетком лечења у 20% може доћи до опоравка.

ХЦВ се најчешће посматра у хроничној форми, у касним фазама. Хронизација процеса се јавља у 50% случајева.

Са асимптоматским преносом вируса Ц, ћелије јетре постепено оштећују, развија се фиброза. У будућности, ако не буде благовременог лечења, повећава се ризик од цирозе или рака јетре.

Дијагноза вирусног хепатитиса у било којој од њених облика заснива се на дефиницији:

  • патоген и његова репликација;
  • маркери инфекције.

Дијагностичке методе укључују имунохемијске и молекуларно-биолошке реакције које откривају:

  • антигени патогена;
  • антитела на вирус;
  • нуклеинске киселине.

Структура вируса Ц

Вирус Ц (БЦ) има једноручну РНК у свом геному. Он је једини међу узрочним агенсима вирусног хепатитиса који има такву структуру. И носилац и пацијент не могу погађати о вирусу који имају. Стога, за откривање патологије са нејасном дијагнозом потребно је неколико студија и дијагностичких тестова.

Геном вируса Ц (његова РНА) састоји се од 10.000 нуклеотидних база. Таква висока хетерогеност одређује карактеристике ХЦВ. При проучавању нуклеотида РНК откривене су значајне разлике у њиховој структури. Узимајући у обзир откривене структурне карактеристике, створена је класификација ХЦВ, према којој:

  • опције (од њих је 6 - 9);
  • подтипови;
  • генотипа.

Неки од њих се налазе у свим земљама без изузетка, неки - локално у одређеним регионима. Након пенетрације у тело, вирус Ц се убаци у ланац нуклеотида молекула РНК. Стално мутира (мутира), а особа може постати носилац од 50 подтипова истог генотипа вируса. Имунолошки систем не наставља са брзом мутацијом: антитела се производе за једну групу вируса, болест постаје хронична.

Дефиниција вируса Ц

Дијагноза ХЦВ-а постала је стварност с појавом молекуларне биологије. Ово се објашњава изузетно ниским садржајем вируса у крви, што не дозвољава изолацију антигена ранијим методама.

Када се сумња на ХЦВ, лабораторијска дијагноза има за циљ да одреди:

  • антитела (Иг Г, Иг М) помоћу ЕЛИСА (ензимски имуноассаи);
  • РНА вирус коришћењем ПЦР (полимеразне ланчане реакције).

Пажљиво молим! Серолошки маркери хепатитиса Ц су РНА-ХЦВ и антитела која се формирају у телу.

ПЦР - дефиниција вируса хепатитиса Ц

РНА - ХЦВ припада раним маркера ХЦВ: његова појава у крви јавља 10 - 12 дана после инфекције, односно много раније повећати аминотрансферазе (АСТ, АЛТ, ГГТ)... Детекција РНА-ХЦВ означава активну репликацију (умножавање) вируса. Ово је "златни стандард" дијагнозе, пошто разјашњава и потврђује дијагнозу чак иу време када су симптоми болести практично одсутни. ПЦР треба извршити да надгледа резултате ЕЛИСА. Изводи се у квалитативним и квантитативним варијантама.

Вирусно оптерећење се сматра високим за ПЦР> 800 хиљада ИУ / мл или 2 милиона копија / мл; ниско - са ПЦР

Пажљиво молим! ПЦР није само квалитативна анализа (откривање РНК вируса), већ такође одређује број копија РНК у 1 мл крви. Ово има важну улогу у постављању ефикасног лечења и евалуације успеха у терапији. Ако је РНА вируса Ц откривена у крвној плазми, то указује на акутну фазу болести. Обим оштећења јетре и ширење патолошких промена - фиброза и упале - откривено је после биопсије. Овај метод је најинтензивнији и поузданији у дијагнози. Манипулација је потпуно нешкодљива за пацијента и траје неколико секунди.

ЕЛИСА - откривање антитела на вирус

Људски имуни систем производи антитела (Иг Г, Иг М) против патогена када улази било који инфективни агент. Добијени имуноглобулини обезбеђују стабилан комплекс са страног протеина (вирус антиген), у квантитативном и квалитативном параметре који су утврђени приликом ИФА. Односи се на индиректни метод испитивања: током истраге, вирус није откривен, али се јавља имунолошки одговор организма на инфективни агент који је ушао. ЕЛИСА се изводи ради ране дијагнозе, праћење процеса у динамици.

Антитела се откривају у 80% заражених само на 5-6 недеља након појаве болести, у 90% - за 12 недеља. Понекад ти тестови дају лажне позитивне одговоре. За такве случајеве постоје посебни тестови - спектар протеина антитела одређује се методом рекомбинантног имуноблотирања.

Да би се постигли поуздани резултати, тестови ПЦР и ЕЛИСА се изводе два пута у одређеном временском периоду. Типично, временски период је 6 месеци.

Тактика посматрања

Да би се разјаснила активност процеса у јетри, како би се утврдила тактика лечења, утврђени су хепатички тестови:

  • трансаминазе крви (АЛТ, АСТ, ГГТ);
  • укупан билирубин и његове фракције;
  • алкална фосфатаза (АФП);
  • укупни протеин са фракцијама.

У зависности од резултата лабораторијских студија, користе се различите тактике управљања пацијентом:

  • Са нормалним личностима, пацијент је под надзором лекара. Са променама у здрављу, тестови се понављају.
  • Уз повећање од 2 или више пута, ЕЛИСА се изводи на анти-ХЦВ.
  • Ако је имунолошки тест ензима позитиван, користи се ланчана реакција ПЦР-полимераза, што резултира одабиром антивирусне терапије.
  • Ат елеватед 2 пута или више показатеља узорака јетре, али негативан ЕЛИСА или повећањем јетре узорака 2 пута, позитивна ИФА и ПЦР негативан динамички мониторинг наставља са инспекцијом и контролом крви биохемијских тестова 1 свака 3 месеца.
  • Код високих биохемијских параметара, позитивни резултати ЕЛИСА и ПЦР-а се спроводе клиничком дијагнозом, одабиру се антивирусни лек, а третман се контролише.

Истраживање биокемијских индикатора

На основу резултата биохемијског теста крви, процењује се ниво аминотрансфераза.

  • АЛТ - аланин аминотрансфераза - је део хепатоцита. Чак и мали вишак норме указује на постојећи хепатитис (укључујући и вирусне) у раним фазама.
  • АСТ - аспартат аминотрансфераза: ако његов ниво прелази АЛТ, то је индикатор почетне фиброзе (пролиферација везивног ткива).

Високе вредности АЛТ, АСТ у крви су резултат некрозе ћелије јетре. Они су индиректни показатељ активности запаљеног процеса. Уколико нивои АЛТ пређе 3 пута норме, говоримо о минималној активности 3 - 10 пута -умереннаиа инфламаторни процес активност, више од 10 пута - хепатитис са високим активношћу.

Ниво АСТ се мења и са другим патологијама, АЛТ се сматра специфичним за болести јетре.

  • Повећање нивоа укупног и директног билирубина се јавља уз повећано образовање или одложено излучивање из тела. Вирусни хепатитис се јавља са кршењем излучивања билирубина. Мучни итери и склера се примећују на нивоима билирубина изнад 30-35 ммол / л, уз додатну акумулацију жуте коже. У хрониини то се не догоди.
  • Елеватед алкална фосфатаза (АП), гаммаглиутаминтрансферази (ГГТ), холестерола и жучних киселина, карактеристика синдрома. Али болести јетре нису једини разлог за њихово повећање.
  • Повећање албумин је повезано са оштећеном функцијом јетре.

Клиничка дијагноза

У корист вирусног хепатитиса Ц индицирају клиничке манифестације. Хроничан ток карактеришу оскудне симптомима Дистурбед малаксалости и повећана замор пред крај дана, доводи до смањене толеранције на уобичајеном физичком активношћу. У нормалним биохемијским анализама, такве клиничке манифестације ретко су повезане са вирусним хепатитисом. Пресавијен клиничка слика се појављује у каснијим фазама: тамо телеангиектатика и јетре "Старс", Хепато - и спленомегалију, жутица беоњаче, коже и слузнице уста, свраб коже (са веома високим нивоом билирубина у крви), тамно урина, избледеле измет, крварење, губитак телесне масе, дланове јетре.

Пажљиво молим! У присуству хроничне ХЦВ инфекције може формирати са великом вероватноћом развити рак јетре стога неопходно у редовним временским интервалима (1, сваких шест месеци) да истражи крв за тумор маркера и алфа - фетопротеин.

Ултразвучни преглед

Поред лабораторијских метода, постоје и додатне методе испитивања које играју важну улогу у дијагнози ХЦВ-а. Ово укључује ултразвучне прегледе. Овим методом испитивања врши се проучавање стања абдоминалних органа. Одређују се величина, густина, структура, локација органа, обимне облике, концетрације, повреда одлива жучи, величина портала и вене вранице. Спленомегалија, хепатомегалија, проширење порталне вене указују на хепатитис са прелазом на цирозу. Даљи преглед, серодиагноза је неопходан да би се искључио или потврдио вирусни хепатитис Ц.

Фибросцаннинг и други тестови

Метод индиректне дијагнозе, еквивалент биопсије - фиброскопирање (еластометрија): неинвазивно, сигурно, може се извршити више пута ради контроле терапије. Индикације за спровођење еластометрије су сумњиве патолошке процесе у јетри, укључујући - присуство вируса.

Постоје и многи дијагностички тестови који су алтернатива биопсији јетре. Тестови омогућавају утврђивање тачне морфолошке слике погођеног органа, постојеће фиброзе, стеатозе, некрозе или упале. Неке од њих:

  • ФиброТест - уз помоћ, свеобухватна анализа 5 биохемијских показатеља и правовремене дијагнозе фаза фиброзе.
  • АцтиТест - одређује 6 биокемијских индикатора и омогућава дијагностицирање некрозе запаљеног процеса у јетри.

Пажљиво молим! Прогноза ХЦВ зависи од благовремене дијагнозе, степена инфекције и жеље пацијента да се излечи. Модерне терапијске методе уз употребу антивирусних лекова омогућавају излечење болести или постизање дуготрајне ремисије, продужавајући живот и побољшавајући његов квалитет код заражене особе или носиоца. Вирусни хепатитис Ц, упркос тешкој дијагнози и продуженом лечењу, није пресуда. Потребно је благовремено обратити се лекару како бисте добили висококвалитетну медицинску негу и пажљиво испунили све своје циљеве.

Дијагноза хепатитиса Б и хепатитиса Ц. Испитивање

Хепатитис је уобичајено име за запаљенске процесе јетре. У већини случајева, вируси хепатитиса узрокују хепатитис Б и хепатитис Ц могу инфицирати када извршава продоран, тетоваже, маникира, путем интравенозне употребе лекова. Постоји висок ризик од заразе код зубара, са хируршким операцијама, трансфузијом крви. Хепатитис Б се преноси сексуално и од мајке до дјетета током трудноће (ризик је око 30-40%). За хепатитис Ц такав преносни пут није од велике важности.

Симптоми вирусног хепатитиса Б и хепатитиса Ц су слични.

Клиничка слика се разликује у акутним и хроничним облицима.

Акутни вирусни хепатитис је запаљен процес у хепатичном ткиву узрокованом недавно (мање од 6 месеци) инфекције. Хронични вирусни хепатитис је запаљење јетра-дистрофичне јетре са благом фиброзом која траје више од 6 месеци.

Симптоматологија виралног хепатитиса је последица интоксикације због повреде функције детоксификације јетре и холестаза (повреда одлива жучи). Пре свега, постоји ефекат церебро-токсичности, што доводи до повећаног замора, поремећаја спавања (у благим облицима акутног хепатитиса и хроничног хепатитиса).

У случају акутне болести, почетни период траје око 2-3 недеље. То је праћено зглобовима, слабост, дигестивне сметње (мучнина, повраћање, губитак апетита), грозница, нарочито уобичајеним у вирусни хепатитис Б. холестазном жутице захваљујући такође карактеристика хепатитиса Б. То мења боју урина (тамне) и фекалија (осветљава ). Често је акутни облик опћенито асимптоматски, посебно код хепатитиса Ц.
Акутни вирусни хепатитис Б у 80% случајева завршава у опоравку, у 20% - иде у хроничну форму. Код хепатитиса Ц, хронични курс се развија у приближно 90% одраслих пацијената и код 20% деце. Хронична форма представља највећу опасност, јер се често претвара у цирозу јетре.

Код нелечених пацијената са менталним депресијом и замора могу бити једини манифестације хроничног вирусног хепатитиса пре дијагнозе. У каснијим фазама хроничног хепатитиса са великим фиброзом и цирозом предњем плану порталне хипертензије синдрома, који је опасна по живот услед акумулација течности у абдомену (асцитес) и могућег унутрашњег крварења.

Први наступ карактеристика симптома хепатитиса морају подвргнути дијагностички тестирање хепатитиса Б вирус (Б) и Ц. С обзиром да је могуће асимптоматска тока болести, као и лакоћа инфекције за ХБВ скрининга треба редовно радити, али из вирусног хепатитиса Б уради Инокулација.

Методе које се користе за откривање инфекције хепатитисом Ц

Најтежи облик вирусног хепатитиса је хепатитис Ц. Само овај вирус карактерише присуство РНК у свом саставу. Сумња о пенетрацији и ширењу вируса у телу се јавља у случају повећане активности ензима јетре. Додатни фактор који указује на потребу дијагнозе јесте припадност могућој носиоцу ризичној групи.

Савети од хепатолога

Током 2012. године дошло је до преокрета у лечењу хепатитиса Ц. Развијена су нова антивирусна средства с директним дјеловањем, која са вјероватноћом од 97% у потпуности ослобађају вас од болести. Од тада се хепатитис Ц званицно сматра потпуно болестном болестом у медицинској заједници. У Руској Федерацији и земљама ЗНД, дроге представљају брендови кофосбувир, даклатасвир и лепидасвир. Тренутно се на тржишту појавило доста понаособ. Лијекови одговарајућег квалитета могу се купити само од компанија које имају лиценце и одговарајућу документацију.
Идите на веб локацију званичног снабдевача >>

У већини случајева, болест пролази без посебних знакова, а носилац можда не зна да је његово тело инфицирано ХЦВ-ом. Да би се открила болест, неопходно је извести низ студија и тестова.

Ако су резултати таквих анализа сумњиви, специјалиста може прописати поновљен преглед пацијента.

У људском телу јетра функционишу као мини-лабораторија. Када вируси продиру, он даје сигнал о томе - постоји повреда производње одређених ензима или смањење њихове активности, биохемијски индикатори промене крви услед замене или појављивања нових супстанци.

На пример, индиректна индикација присуства ХЦВ у тијелу може бити промјена у активностима ензима АЛТ и АСТ-трансфераза који улазе у крвоток због болести ткива јетре.

Али овај фактор може свједочити ио другим болестима јетре и унутрашњих органа, тако да су специјалисти развили посебне врло ефикасне методе за дијагнозу вируса хепатитиса Ц.

Да би се проверило да ли постоји болест, неопходно је провести пред-лабораторијске, лабораторијске и клиничке студије.

Општа симптоматологија болести

Болест се може наставити у латентној форми и ући у хроничну фазу, а ова варијанта је већина случајева. Међутим, након завршетка инкубацијског периода вируса, који може трајати до мјесец дана, можда постоје одређени знаци који подсећају на симптоме грипа. Важно је обратити пажњу на њих на вријеме и проверити доступност ХЦВ-а.

На такве знакове су рангирани:

  • опште погоршање здравља;
  • повишена телесна температура;
  • бол у мишићима и зглобовима;
  • чешће - појављивање кожних реакција.

Ови знаци се манифестују постепено, тако да пацијент може лако збунити своје стање уз обичну прехладу или исти грип.

Али након неколико дана, природа тока болести се мења. Појављује се:

  • болне сензације у региону десног хипохондрија;
  • оштећење или потпуни губитак апетита;
  • затамњење урина;
  • појашњење фецеса;
  • стање мучнине, потреба за повраћањем.

Ако не почнете лијечење на време, болест иде у хроничну фазу.

Знаци такве промене у природи болести понекад су тако неприметни да заражена особа им не придаје никакав значај, и све отписује за банални умор. Али у ствари они захтевају велику пажњу и преглед од стране специјалиста.

Недавно сам прочитао чланак који описује употребу комплекса лекова "СОФОСБУВИР ДАКЛАТАСВИР "за лечење хепатитиса Ц. Са овим комплексом, може се ФОРЕВЕР ослободити ХЕПАТИТИС Ц.

Нисам навикао да верујем ни на какву информацију, али сам одлучио да га проверим и наручим. Дрога није јефтина, али живот је скуп! Нисам осјетио никакве нежељене ефекте из процедуре, већ сам мислио да је све узалудно, али мјесец дана касније сам прошао тестове и ПЦР није откривен, није га пронашао након мјесец дана лијечења. Кардинално побољшано расположење, поново је постојала жеља да живите и уживате у животу! Узимала сам лек 3 месеца и као резултат, вирус је нестао. Покушајте и ви, и ако сте заинтересовани, онда је доленаведени чланак.

То су симптоми као што су:

  • брзи почетак замора;
  • физичку болест и неспособност да се носи са уобичајеним оптерећењем;
  • нелагодност у абдомену;
  • честа појава повраћања и мучнина;
  • болест мишића и зглобова;
  • поремећено функционисање црева.

Ако болест стиче хронични ток, јављају се жутице, повећана јетра и слезина, крварење, губитак тежине. Ово угрожава цирозу јетре или почетак рака.

Присуство горе наведених знакова или забринутости о продору ХЦВ у крв указује на то да је неопходно подвргнути свеобухватном прегледу здравственог стања и добијању квалитетне медицинске заштите. Таква интервенција подразумева лабораторијска испитивања која потврђују инфекцију и ширење вируса у телу.

Лабораторијско истраживање

Дијагноза хепатитиса Ц и накнадно постављање режима лечења део је професионалне компетенције специјалисте заразне болести која је специјализована за препознавање акутног тока болести. Ако пацијент има хронични облик болести, треба да се консултује са хепатологом.

Да би се проучио процес промене стања јетре, препоручује се пацијенту да подвргне такве студије као тестови нивоа билирубина и хепатичних ензима (АЛТ).

Постоји и обавезно преузимање тестова јетре за биокемију, чија студија вам омогућава да проверите присуство болести и степен оштећења ћелија јетре. Откриване крварења тела указују на тестирање крви за присуство ХЦВ-а.

Постојање вируса и његових карактеристика идентификовани су коришћењем посебних маркера. То су маркери анти-ИгМ / Г и ХЦВ РНК. Такве анализе представљају две врсте студија:

Имунолошка (ЕЛИСА). Овај тип се заснива на дефиницији постојања антитела на вирус у крви. Присуство антитела је поуздан индикатор ХЦВ-а. Произведе их тело (тј. Леукоцити крви) ради уништавања вируса. Након што је особа била болесна, антитела остају у структури крви за цео живот. Ово је заштитна реакција имуног система.

Ако ова анализа даје позитиван резултат, постоји сумња на инфекцију. Даље, потенцијални носилац мора да прође комплекс потврђених дијагностичких метода. То је због чињенице да постојање антитела није директан доказ присуства болести. Можда је тело једном већ интерактивно са вирусом, на пример, током вакцинације. Или, на пример, лажно позитивни резултат се често може забиљежити код трудница.

Да би се направила тачна дијагноза, стручњак треба да провери резултате генетских студија. Неоспорна предност таквих тестова је могућност дијагнозе ране фазе болести, једноставности употребе, способности контроле прогресије инфекције. Недостаци ЕЛИСА укључују неспособност утврђивања присуства вируса, али само одговарајућа антитела на њега;

Генетски (ПЦР). Ова врста је заснована на одређивању генетског материјала ХЦВ у крви са ПЦР (метода ланчане реакције полимеразе). Утврђено је присуство РНК вируса. Као резултат тога, постају доступни подаци о концентрацији вируса и његово чланство у одређеном типу. Ова метода је у стању да детектује чак и малу концентрацију ХЦВ.

Пошто је болест може бити различитог карактера порекла и, сходно томе, различите врсте вируса који су проузроковали студија помоћу ПЦР-а обезбеђује најпотпуније информације о етиолошким карактеристика је да је вирус који је покренуо ову болест. Предности ове врсте анализе сматрају се квалитативним и квантитативним испитивањем ХЦВ у крвном серуму. Ово омогућава лекар прописати оптималну шему да се отараси болести, да прати динамику болести, да се процени ефикасност одабраних метода лечења.

Ова анализа се састоји од три фазе: квалитативног ПЦР-а, затим квантитативног ПЦР-а и одређивања генотипа. Захваљујући најновијим истраживањима, специјалиста може најефикасније водити терапију за болест и примијенити лијеке одговарајуће за одређени тип вируса. Ово ће помоћи у отклањању болести што пре.

Након положеног скупа лабораторијских тестова, лекар прописује оптимални режим лечења:

  • ако су биокемијски индикатори у границама норме, утврђује се стање пацијента и одређују се периодична понављања студија;
  • у присуству абнормалности у функцији јетре, и ЕЛИСА позитивна ПЦР резултата, стручњак додељује клиничких студија атрибуте режим и динамику ефикасности за контролу болести и одабраних лекова и дрога.

Која је карактеристика клиничке дијагнозе? Да би се утврдио степен оштећења јетре, користи се ултразвучна метода. На основу података добијених током ултразвука, стручњак може да суди о променама у величини тела, структуре, структуре, густине ткива, у неким случајевима - и функција.

Прецизнији подаци о статусу јетре дају анализу биопсије, чиме се утврђује степен фиброзне и некрозе-запаљиве штете.

На основу свих врста дијагнозе, доктор одређује дијагнозу и прописује најефективнији третман. Ако експерт постоји било каква сумња о присуству вируса или његова припадност одређеној врсти, можда потенцијалном пацијенту ће бити поново именован или додатних тестова, који ће помоћи да се успостави прецизнију слику о њеном стању.

Хепатитис Ц: начини заразе, дијагнозе, начини лечења

Хепатитис Ц (хепатитис Ц) је запаљенско обољење јетре изазвано инфицираношћу тела вирусом ХЦВ, вирусом хепатитиса Ц. Када се вирус хепатитиса Ц мултипликује и ткиво јетре остаје оштећено, развија се патолошки процес, развија се цироза јетре и развија се карцином. Овај облик се сматра најопаснијим врста хепатитиса није само због способности да поремети опште функционисање организма и изазвати болести које доводе до инвалидитета или смрти, али и због природе болести. Симптоми хепатитиса Ц, по правилу нису изражени, инфекција се наставља у латентном облику, а вакцина против хепатитиса Ц је одсутна.

Шта је хепатитис Ц (хепатитис Ц)?

Хепатитис Ц (ХЦВ) постао је познат као одвојена болест дуго пре откривања специфичног заразног средства. "Нон-А нон-Б хепатитиса», нон-А, нон-Б хепатитис (НАНБХ) је као манифестација болести, што му је омогућило да означи хепатитиса групи, али се разликују ток болести и тешких компликација. Након тога, вируси који узрокују хепатитис Д и Г такође су изоловани у хепатитису.
Први пут је посебан облик вируса изолован 1989. године. Тренутно је званично идентификовано шест генотипова вируса ХЦВ, а још 5 су подвргнуте лабораторијским тестовима. Такође је познато око 90 подтипа ХЦВ-а. Најчешћи облик је први облик вируса, одговоран је и за најтежи облик хепатитиса Ц, отпоран на терапију интерфероном.
Варијабилност хепатитиса генотипова, Ц вируса са новим производима инфекцијом компликује развој вакцине против ове болести, која у овом тренутку, према статистичара процењено да пати око 150 милиона људи широм света. Годишње од компликација изазваних хепатитисом Ц, око 350 хиљада људи умире. Специфична избрисана симптоматологија доводи до ситуација када је дијагноза ХЦВ хепатитиса откривена случајно током анализе или је успостављена у фази развоја компликација. Активне мутације вируса доводе до стварања измијењених копија генотипа, што узрокује висок проценат хроничног облика болести.

Знаци хепатитиса Ц

Фото: Јарун Онтакраи / Схуттерстоцк.цом

Појава првих знакова хепатитиса Ц зависи од отпорности тела. Од инфекције до примарне симптоматологије може се узимати од 2 недеље до 6 месеци. Ако постоји сумња о контакту са инфекцијом за рану дијагнозу, проводи се ПЦР анализа крви како би се утврдило присуство РНК вируса у крви, 2 недеље након инфекције.
Хепатитис Ц има карактеристику "љубазног убице": латентни симптоми и тешке компликације доводе до озбиљних оштећења организма у одсуству сумње на присуство ХЦВ-а.
Први симптоми овог облика вирусног хепатитиса укључују смањење радне способности, стање астеније, осећај замора.
Главни знаци хепатитиса Ц, који се манифестују током фазе изговарања мултипликације вируса у телу, сматра се:

  • смањење или недостатак апетита;
  • мучнина;
  • општа слабост, астенија, погоршање здравља;
  • бол у зглобовима;
  • иктерус коже, слузокоже, склера ока као резултат повећања концентрације билирубина у крви због оштећења јетре код хепатитиса Ц;
  • повећати величину јетре и слезине.

Узроци хепатитиса Ц, начини лечења хепатитиса Ц

Метода преноса ХЦВ вируса је хематогена, са крвљу и другим биолошким течностима. Инфективни агенс је присутан чак иу најмању количину крви и остаје активан до 5 дана када се течност осуши на собној температури. Инфекција настаје уношењем инфицираних ХЦВ биолошког материјала у другу организма са инвазивним процедурама, као иу контакту са ране површине (огреботина, огреботине, пукотине и лезија слузокоже и тако даље. Д.). У том погледу, идентификујте главне начине инфекције:

  • кроз ињекције са нестационираним шприцима за вишекратну употребу, игле;
  • трансфузија крви, плазма из инфицираног донора, трансплантације органа и ткива;
  • у процесу коришћења нестационарних инструмената у стоматолошким ординацијама, козметичким салонима, маникирним салонима, пиерцингом, цртањем тетоважа итд.
  • са трауматским сексуалним контактом: довољно мале пукотине на слузокожи;
  • вертикални начин инфекције: од мајке до фетуса током трудноће;
  • начин кућне инфекције код употребе лопатица, четкица за зубе итд. (то је изузетно ретко);
  • приликом испоруке и оперативне процедуре, трауме у нестерилним условима.

инактивација вируса настаје када сурфаце треатмент витх дезинфекционим средствима која садрже хлор третманом са водом од најмање 60 ° Ц у трајању од 40 минута или три минута кључања.
Ризичних група становништва које су изложене високим ризиком од ХЦВ инфекције, носи медицинско особље и запослени у санитарно-и-епидемиолошке институција, наркомани са инвазивне примену лекова, људи са великим бројем незаштићеног сексуалног односа, сексуалних партнера заражених пацијената, укључујући и скривене носилаца хепатитиса Ц, особе са аутоимунским болестима, имунодефицијенције, итд.
Вирус хепатитиса Ц се не емитује путем додира хандсхаке капљица у ваздуху, ретких случајева инфекције у доје (у присуству рана на сиса пукотина у мајке и слузокоже лезија у устима детета), и контакт домаћинства, дељење. Превенција хепатитиса Ц су стерилизација медицинских и козметичких алата за инвазивне процедуре и ињекције, складу са правилима личне хигијене у кући, и механичких метода за заштиту секс са непознатим партнерима.
Спречавање инфекције дјетета хепатитисом Ц током трудноће је посебна терапија за смањење вирусног оптерећења током трудноће, као и испитивање и лијечење жене пре зачећа.

Врсте и стадијуми хепатитиса Ц

Постоје два облика хепатитиса Ц. Акутни облик ове вирусне инфекције се дијагностицира у ријетким случајевима због избрисане клиничке слике. Најчешће се откривање акутне фазе случајно дешава током превентивног прегледа или када особа тражи дијагнозу у случају сумњивог контакта.
Уз благовремену терапију, 20% акутних облика хепатитиса Ц је потпуно излечено. У одсуству или неефикасности лечења, акутни хепатитис Ц постаје хроничан.
Хепатитис Ц у хроничној форми се такође може појавити асимптоматски без ефекта вирусног оптерећења на тијелу, без клиничких манифестација и специфичних симптома. Ова група скривених носача вируса отежава прикупљање статистичких података о преваленцији ХЦВ-а, јер се то одређује само тестирање крви за маркере хепатитиса, али може допринети ширењу инфекције.
Класичан ток хроничног хепатитиса Ц прати оштећење ћелија јетре, развој ткивне фиброзе. У одсуству лечења, фибротичне жариште изазивају развој цирозе јетре, формирање тумора рака и других опасних компликација.

Компликације хепатитиса Ц

Фото: Ден Рисе / Схуттерстоцк.цом

Стопа развоја компликација зависи од општег стања тела, способности имуног система да производи антитела, облик генотипа и присуство мутација вируса, као и начин живота и исхрану човека. Употреба алкохола, масних намирница доводи до значајног убрзања у развоју патолошких процеса, алкохолног, токсичног хепатитиса.
Хепатитис Ц може изазвати следеће болести и поремећаје:

  • фиброза јетреног ткива;
  • стеатохепатитис, замена ткива јетре с мастима;
  • цироза јетре;
  • хепатоцелуларни карцином, канцерогена трансформација јетреног ткива;
  • хипертензија портфолиа;
  • асцитес, акумулација течности у органима перитонеума;
  • проширене вене унутрашњих органа;
  • хепатична енцефалопатија;
  • хронична тровања тела са производима дезинтеграције ткива и због недовољне функције јетре;
  • латентно унутрашње крварење.

Хепатитис Ц је такође опасан стварањем повећаног ризика од развоја хепатитиса Б приликом изложености инфекцији због смањене функције јетре.

Дијагноза хепатитиса Ц

За дијагнозу хепатитиса Ц користе се следеће методе:

  • сакупљање анамнезе и преглед пацијента, палпација перитонеалних органа;
  • биохемијски тест крви;
  • тест крви за антитела на вирус хепатитиса Ц (анти-ХЦВ) и ХЦВ-РНК помоћу ПЦР-а;
  • тест крви за присуство антитела ИгМ класе (анти-ХЦВ ИгМ), показујући акутну фазу болести;
  • анализа генералне крви, испитивање коагулационих карактеристика (коагулограм);
  • ултразвучни преглед јетре, слезине, перитонеалних органа.

У неким случајевима је прописан лабораторијски преглед ткива јетре (биопсија).
Ови поступци омогућавају утврђивање присуства инфекције и утврђивање тачне дијагнозе са дефиницијом ХЦВ генотипа.

Лечење вирусног хепатитиса Ц у различитим фазама

Хепатитис Ц подразумева свеобухватну терапију која има за циљ подупирање тела и борбу против ХЦВ вируса заједничког или специфичног антивирусног ефекта. Ток терапије код пацијената са хепатитисом Ц обухвата:

  • терапија лековима са антивирусним лековима;
  • узимање лекова ради одржавања функције јетре;
  • препарати од ресторативне акције, имуномодулатори, стимуланти имунитета.

Курс терапије лековима неће бити ефикасан ако се не придржавају правила исхране, ограничавајући физичку активност, посматрајући режим тог дана. Вирус хепатитиса Ц је агресиван утицај на људски имунолошки систем и ткива јетре, што доводи до потребе за спаринг исхране, правилног одмора, како би се спречило могућност контакта са другим вирусних и бактеријских инфекција.

Традиционална антивирусна терапија за хепатитис Ц

За борбу ХЦВ вируса антивирусних лекова се користе за стимулишу имуни тела. Најефикаснија (45-50% лека у зависности од фазе генотипа болести и ХЦВ изазива хепатитис) се сматрају лекове рибавирин и интерферон алфа-користи, зависно од фазе и општег стања пацијента, посебно или у комбинацији.
Општи ток терапије овим лековима, дозама и режиму одређује лекар хепатолог на основу дијагностичких података и одговора пацијента на лекове. Просјечно трајање антивирусне терапије овим лијековима је 12 мјесеци.
Комбинација лекова може изазвати алергијске реакције, њихова употреба је неприхватљива у трудноћи и одређеним болестима. Ефикасност терапије се процењује на основу података о тестовима крви за смањење нивоа вирусног оптерећења (ХЦВ РНА) и степена активности трансмнасе.
Лекови могу узроковати значајне нежељене ефекте. Примање интерферон групу у великим дозама често као пратњи значајног погоршања карактеристичном периоду прилагођавања лека (до 1 месец) и праћена хипертермијом до 38-39 ° Ц, главобољу и бол у зглобовима, губитак тежине, сува кожа, опадање косе. Такви симптоми пролазе независно и не захтевају повлачење лекова.
3-4 месеца након почетка узимања лекова интерферон групе, може се видети промјена у крвној слици: смањење концентрације тромбоцита, леукоцита. У зависности од степена промене, узимање лекова може се укинути на кратко.
Озбиљне компликације које захтевају корекцију терапије су хеморагична крварења и везивање бактеријских инфекција.
Приликом узимања рибавирина, може се јавити мања диспепсија, хемолитичка анемија, повећана концентрација мокраћне киселине, главобоља.
Лечење се врши под надзором специјалиста.

Директно дејство лекова на ХЦВ

У 2013. години, нови лек, развијен преко 11 година, клинички је тестиран и одобрен као антивирусно средство за директну акцију. Софосбувир произведен од стране Гилеад-а (САД) патентиран је као једини активни састојак који је тренутно доступан, према студијама, лечење 95% случајева хепатитиса Ц.
Због високих трошкова производње (основни третман са сопхосбувиром у Сједињеним Државама кошта 84.000 долара), компанија је пренела права лиценце за производњу лека. Тренутно, производња Хепцината у Индији је такође на тржишту лекова уз трошак лекова за терапију на 880-1200 америчких долара.
Антивирусни лек садржи комбинацију сопхосбувира и даклатасвира узет усмено. Дозирање и трајање курса израчунава хепатолог на основу информација о генотипу вируса, стадијуму фиброзе јетре, индивидуалним карактеристикама пацијента. Лекови су ефикасни за све генотипове ХЦВ-а, немају контраиндикације код ХИВ-инфицираних пацијената. Ток третмана је од 12 до 24 недеље.

Хепатопротектори у хепатитису Ц

Препарати - хепатопротектори, који су део терапије за хепатитис Ц, имају за циљ одржавање функција захваћеног органа. Без лечења тела болести, они помажу у одржавању и обнављању здравља јетре, регенерирају ткива.
За такве препарате који су ефикасни код хепатитиса Са, носите Ессентиале, Карсил, Липоевују киселину, Силимар, Фосфоглив и друге. Поступак узимања хепатопротекста започиње без обзира на присуство или одсуство антивирусне терапије и завршава се са клиничким очувањем јетре потврђеним лабораторијским тестовима и инструменталним студијама.

Имуномодулатори

Пошто је имуни систем пати од вирусног оптерећења константе, узимање лекова у циљу јачања улази у укупан терапију пацијената са хепатитисом Ц. Најчешћи имуномодулатори за хепатитис Ц обухватају лекове и Задакин Темоген.

Дијететска храна

Лечење хепатитиса Ц и његове компликације праћено је именовањем медицинског система за исхрану за Певзнер, дијете број 5. Усклађеност са исхраном помаже у функционисању јетре и других органа дигестивног система, успоравајући развој компликација хепатитиса Ц.
Основни принципи потрошње исхрана №5 лимит производа који побољшавају излучивање пробавних сокова: масне, зачињене, слано, димљене, конзервиране хране, кафе, јаки чај. Алкохолна пића су потпуно искључена. Препоручена дневна запремина течности (вода, компоти, воћна пића и биљни сокови са ниским иритантним ефектом на желуцу) је од 2 до 3 литре.

Прогноза резултата лечења хепатитиса Ц

Прогноза лечења виралног хепатитиса Ц зависи од времена почетка терапије, стадијума болести, присуства и степена компликација, избора терапије и именовања специјалисте.
Најповољнија прогноза за рано лечење у раној, акутне фазе хепатитиса Ц, где је болест још није донет у хроничну инфекцију са тешких компликација дегенерације ћелија јетре, токсичних лезија тела.
Поштовање принципа исхране у исхрани, одбијање алкохола у великој мери помаже да се избјегне рани развој компликација и генерално одржава здравље.
У зависности од избора лекова за директне или опште антивирусне акције, прогноза за вирусни хепатитис Ц је од 45 до 95% стопе излечења. Комплексни третман хепатитиса Ц са употребом нових антивирусних лекова помаже у лечењу болести и избегавању компликација.

Спречавање хепатитиса Ц

Фото: Алекандер Ратхс / Схуттерстоцк.цом

Због великог броја генотипова вируса ове врсте хепатитиса и његове способности за мутације, стварање бројних подврста, специфична превенција хепатитиса Ц у облику вакцинације је још у развоју. Неспецифичне мере за спречавање обољења вирусним хепатитисом Ц сматрају се рестриктивним мерама за заштиту од пенетрације вируса у тело и целокупног јачања тела.
Хепатитис Ц се преноси искључиво контактирањем биолошке течности која садржи вирус, са површином ране или подкожним ткивима. Због тога је превенција болести искључивање ситуација таквих контаката:

  • контролу над поштовањем санитарних и хигијенских норми приликом коришћења услуга здравствених установа, козметичких и стоматолошких салона, искључујући могућност коришћења нестерилизованих хируршких инструмената, шприцева за вишекратну употребу;
  • ограничавање броја сексуалних контаката са непознатим партнерима, коришћење личне заштитне опреме током сексуалног односа;
  • Редовна анализа маркера вируса приликом рада у условима повећаног ризика од инфекције.

Око 20% случајева инфекције са хепатитиса Б вирус овог облика су непознате етиологије, болест се види у људима водећим здрав живот, не подвргнута поступку трансфузије крви или трансплантације органа, имају једно редовно сексуалног партнера, а није склон убризгавање дроге. Превенција - мера спречавања болести, која се мора пратити чак и без јасне вјероватноће инфекције.
Друге мере укључују превенцију не-специфичног здравом начину живота, ограничити коришћење алкохола, уравнотежену исхрану која би могла ометати развој болести и њених компликација, чак и када вирус уђе у тело.

Хепатитис Ц: превентивне мере у присуству пацијента у породици

Хепатитис Ц је заразна болест која се преноси углавном кроз крв. Када живите заједно на истом подручју са зараженим пацијентом, нема потребе за заштитом просторија, спријечити дотични контакт или користити одвојени прибор за јело.
Важно је искључити заједничко коришћење једне бријање машина (због могућих смањења), четкице за зубе дезинфикујте површине на којима постављају кап крви код куће повреде, блич раствор (1: 100), који садржи хлор течности, кључалом или испирање на 60 ° Ц, посматрати мере заштите током сексуалног односа, не дозвољавају повреде гениталија, развој болести праћене оштећењем коже или мукозних мембрана. У присуству повреда, отворене ране, препоручује се опрез.
Због смањене отпорности тела на друге врсте хепатитиса, члановима породице и особљу за негу препоручује се вакцинација против хепатитиса А и Б.

Спречавање инфекције фетуса и новорођенчета

Због избрисаних симптома, присуство виралног хепатитиса Ц код жене може бити дијагнозирано већ у фази трудноће приликом процене тестова инфекције. У таквим случајевима, прогноза преноса вируса на фетус зависи од виралног оптерећења мајчиног тијела, одређеног бројем титара у крви.
Да би се смањила вероватноћа инфекције фетуса, препоручује се узимање неких генеричких лекова, као и именовање хепатопротектора за смањење вероватноће компликација трудноће узрокованих повећаним стресом на јетру.
На ниском вирусног оптерећења вероватноће рођења зараженог детета је мали, али да се утврди присуство вируса у крви може само 1-1,5 година након рођења, као крв детета за дуже време су антитела мајке.
Пуна профилакса је тест крви за присуство вируса прије концепције и ток лечења болести ако је присутан пре трудноће. У току гестационог периода, противвирални лекови су забрањени за употребу због могућих тератогених ефеката на фетус и повећаног ризика од побачаја.
Да би се смањила вероватноћа инфекције новорођенчета, исте мере се препоручују као код живота код одраслих заражених особа.
Дојење од стране мајке с хепатитисом Ц је сада безбедна јер нема вируса у мајчином млеку. Међутим, потребно је да пажљиво прати стање коже и брадавица дојке покрива да спрече рендани, пукотине, и проверите слузокоже у присуству бебе рана, огреботина, гљивичне инфекције.
Ако имате брадавице ареа Мицротраума препоручују коришћење уложака који не дозвољавају било какву течност из ране у устима дете, или привремено прекине до опоравка коже дојења.

Лабораторијска дијагноза хепатитиса Ц

МИ Микхаилов, Институт за епидемиологију и микробиологију. НФ Гамалеи РАМС, Москва

Када се наведе дијагноза "хепатитиса Ц", морају се размотрити сљедећи најважнији фактори:

  • показатељи активности "хепатичних" ензима;
  • присуство или одсуство маркера инфекције вирусом хепатитиса Ц (ХЦВ) и другим хепатотропним вирусима;
  • епидемиолошка историја;
  • резултати клиничког прегледа пацијента. Само свеобухватан преглед ових фактора омогућује дијагнозу ове болести са високим степеном поузданости. Лаборатори радник мора пружити објективне информације о одређивању опсега вирусних антигена и антитела, као ХЦВ РНК, омогућавајући клиничара, запосленог услуга и епидемиолога трансфузију крви да одлучи изазове са којима се суочавају. Најчешће је:
  • Идентификација особа са ХЦВ-ом за смањење хепатитиса Ц након трансфузије;
  • дијагноза и диференцијација акутног и хроничног хепатитиса Ц;
  • прогнозу болести;
  • именовање, евалуацију и прогнозу ефикасности терапије;
  • истражити ширину ХЦВ у популацији и различитим групама становништва.
    Истовремено, главна подручја рада које врши лабораторијско особље су:
  • развој и одабир најинтензивних метода за откривање маркера ХЦВ инфекције;
  • дефинисање критеријума за објективно вредновање добијених резултата;
  • развој оптималних алгоритама за обављање лабораторијских студија;
  • увођење система за побољшање откривања маркера ХЦВ инфекције.

    Основа лабораторијске дијагнозе хепатитиса Ц. ХЦВ служи знање о његову репликацију, информације о динамици појављивања и нестанка маркера инфекције, као и модерне имунохемијских и молекуларне биолошким методама за детекцију антигена, антитела и нуклеинске киселине.

    ВИРУС ХЕПАТИТИС Ц. ХЦВ је први пут идентификован 1988. године када је група истраживача на челу са М. Хоугхтоном и Цхоо К.Л, користећи нове молекуларне биолошке методе истраживања, клонирале и секвенце генома вируса [1]. Честица вируса хепатитиса Ц има сферни облик са просечним пречником од око 50 нм [2,3]. Покушаји да визуелно детектовати и проучава структуру вируса хепатитиса Ц предузетих од откривања вируса, али до сада нема постоје добро документовани Резултати ових студија, вероватно због тешкоћама акумулације вирусних честица у потребним количинама.

    ВГСединственни члан рода хепацивирус у породици Флавивиридае, која укључује вирусе попут вируса стадо приплодних бикова дијареја и свињске грознице (род Пестивирус) и жуте вируса грознице, Данг вирус и ГБ-вирус: РН-А, РН-Б и РН-Ц / ХГВ (рода Флавиви-рус). Структура вируса хепатитиса Ц може се представити на следећи начин (Схема бр. 1). Нуклеокапсид обухвата РНК хепатитиса Ц вируса нуклеокапсидног врху обложена липидног коверту увучени у њему намаз протеине које енкодира ХЦВ РНК. Вирус геном садржи линеарни једноланчани РНК молекул позитивног поларитета, дужину од око 9600 нуклеотида. Организација ХЦВ гена је слична другим флавивирусима. Она разликује две зоне које кодирају структурне и не-структуралне (функционалне) протеине. Гени који кодирају структурне протеине налазе се у 5 'региону генома вируса, а не-структурални у региону 3'. Ген ХЦВ има један отворени оквир читања (ОРФ), појединачни полипептид (приближно 3000 амино киселине), који под дејством ћелијским и вирусним протеазама исечени у структурне и структурних протеина.

    Сл. 1. Структурни елементи ХЦВ

    Структурне протеине укључују протеине кодиране Цоре, Ел и Е2 са ХЦВ РНА зонама. Она је открила три облика Ц-ХЦВ протеина: пуне дужине (п21) са моларном масом - 21 кД, скраћен (П19) и облик (П16) је детектован у нуцлеоли инфицираних хепатоцита. На својој површини, Ц-протеин носи различите високо конзервиране Б-ћелијске епитопе, чија је постојање изузетно важна за детекцију антитела на ХЦВ у току лабораторијске дијагнозе хепатитиса Ц.

    РНА региони ХЦВ-Е1 и Е2 кодирају протеине са молекулском тежином од 31 и 70 кД. Ови протеини имају неколико локација Н-гликозилације; У Е1 протеину је идентификовано до 6 таквих места, ау Е2 - 11. Информације о малом протеину, п7, пронађене су у одељку Е2, које није пронађено у структури вируса.

    Означавање регија ближе крају 3'-краја ХЦВ РНК - као зоне које носе информације о неструктурним протеинама вируса - указује на то да ови протеини нису структурне компоненте вирусне честице. У неструктурној зони, ХЦВ РНА је додијељена места означена као: НС2, НС3, НС4А, НС4Б, НС5А и НС5Б. Већина протеина кодираних не-структуралним зонама ХЦВ РНК су неопходне за репликацију вируса.

    Упоредна анализа нуклеотидних секвенци РНК изолата ХЦВ-а добијених у различитим регионима света, па чак и током обољења од истог пацијента открила је главну особину овог вируса - високу хетерогеност РНК. Положај великог генетичке варијабилности ХЦВ РНК је основа теорија да објасни: дугорочне (понекад доживотно) носилац вируса, често развој хроничних болести, тешкоће у успостављању ефикасног третмана и вакцине. Најзначајније разлике у секвенцама ХЦВ РНК су концентрисане у Н-терминалу у региону Е2, који се назива "хипервариабилни регион" (ХВР) [4].

    Тренутно постоји 6 главних генотипова и преко 100 подтипова ХЦВ. Генотипови 1а, 1б, 2а, 2б, 2ц и преко рачуна за више од 90% ХЦВ изолата добијене у Северној и Јужној Америци, Европи, Русији, Кини, Јапану и Аустралији / Новом Зеланду [5]. Генотипови 4, 5а и 6, респективно, забележени су у Централној и Јужној Африци, југоисточној Азији. У Русији и земљама ЗНД забиљежена је преваленција генотипа 16 (не мање од 68,9%) [6,7]. Верује се да пацијенти заражени генотипом 1 (посебно 1ц) реагирају лошије на третман у поређењу са пацијентима инфицираним другим генотиповима вируса.

    ХЦВ пацијента кружи као становника вирусних честица, чија генома разликују међусобно 1-2% (квазиспетсифицхности) као резултат мутација које акумулирају током инфекције и / или направљених у пацијенту током инфекције. Ови мутантни облици могу пружити јаче или репликације може помоћи вирус да избегне имунски одговор и потенцијално утичу на исход акутне инфекције, разлике у току болести и одговор на ИФН [8].

    ДЕТЕРМИНАЦИЈА АНТИ-ХЦВ. Након открића вируса ХЦВ и одређује своју улогу у развоју после трансфузије хепатитиса - "ни А ни Б" истраживачи су изазвани да развију методе способне откривања оних са ХЦВ и погодни су за постављање дијагнозе акутног и хроничног хепатитиса Ц. Утврђено је да ХЦВ антигени циркулише у изузетно ниске концентрације, а јасно је да методолошки ниво касних 80-их година КСКС века, користе за детекцију вирусни антигени је очигледно недовољна.

    Године 1989. група истраживача компаније "Цхирон Цорпоратион" под вођством К-Л.Цхоо извршила клонирање ХЦВ РНК и био имунореактивних Олигопептиди које реагују са антитела циркулишу у крви пацијената са хроничним хепатитисом "ни ни Б". Ови олигопептиди су постали основа за дијагностичке лекове за откривање антитела на ХЦВ. Ово је утврдило брз напредак у развоју и производњи дијагностичких производа. Главни метод коришћен за детекцију анти-ХЦВ је ензим-везан имуносорбент есеј као метод који испуњава услове практичне здравствене -те Висока осетљивост, специфичност и лакоћа понашања.

    С обзиром да ХЦВ опстаје у крви болесника са акутним и хроничним хепатитисом Ц у комбинацији са анти-ХЦВ дијагностичких производа фокусирају градитеље концентрисана на стварање тест система за детекцију антитела, пружа највеће могуће идентификацију носилаца вируса, а што раније дијагностиковање акутне инфекције. Разноликост антигена и антигенских детерминанти кодираних структурном и неструктурног ХЦВ РНК зони, смер одређује у дизајну дијагностичких припремама за тај аранжман и олигопептида користе за њихово креирање. Од времена откривања ХЦВ-а, створени су дијагностички системи три генерације (Табела 1).

    Табела 1
    Дијагностички лекови за откривање анти-ХЦВ [9]

    Коришћени пептиди,
    зона ХЦВ РНК у којој
    они су кодирани

    % детекција носача
    ХЦВ

    Време првог
    идентификовати
    анти-ХЦВ од
    рана жутица

    5-1-1 НС3
    Ц100-3 НС4

    Ц22-3 Цоре
    Ц200 НС3 и НС4
    НС3п НС3
    Ц 100-3 НС4

    Ц22-3 Цоре
    Ц200 НС3 и НС4
    НС3п НС3
    Пептид НС5

    Увођење додатних пептида, посебно с22-3 (Цоре), у дијагностичке препарата 2. и 3. генерације дозвољено реши главни проблем, односно повећање осетљивости, специфичност, и што је најважније, детекцију анти-ХЦВ. Захваљујући дијагностичким кривинама треће генерације, могуће је открити до 97% ХЦВ носача. Истовремено, одређена дискусија је била подстакнута увођењем пептида кодираног НС5 ХЦВ РНА регионом у дијагностикум. Према неким истраживачима, присуство овог пептида није од фундаменталне важности за побољшање квалитета дијагностичког лијека. [10,11]. Међутим, антитела на НС5 могу се открити у ранијем периоду инфекције, што побољшава квалитет лабораторијске дијагнозе акутног хепатитиса Ц. [12].

    Тренутно се користе дијагностички препарати треће генерације широм света, укључујући и у Русији. Пептиди који се користе у дијагностичким препарата добијених рекомбинантном технологијом (нпр дијагностичке компаније: "Дијагностички агенси", Низхни Новгород; "вектор", Новосибирск; "Роцхе"; "Абботт" ет ал.), Или синтетички ( 000 МЦ "Авиценна", Санкт Петербург, "Органон", итд.). Дијагностика, у којој су оба типа пептида коришћена истовремено, добила је ознаке као препарате четврте генерације. По својим карактеристикама, ови лекови немају значајне разлике. Упоредни тестови се редовно врши руског Министарства здравља, показало је сличан осетљивост дијагностичких производа домаћих и страних произвођача.

    Утврђено је да се употреба дијагностичких лекова треће генерације за откривање анти-ХЦВ међу имунокомпетентним популацијама (на примјер, донаторима крви) процјењује на 98,8-100%. Истовремено, међу имунокомпромитованим појединцима, на пример, као што су пацијенти након трансплантације бубрега, коштане сржи или особе инфициране ХИВ-ом, ова бројка је знатно нижа - 50 до 95% [12]. С.Георге ет ал. [13] показала је да 8,4% пацијената са ХИВ инфекцијом има лажно негативне резултате откривања анти-ХЦВ. А код таквих пацијената у току посматрања, може се забележити ефекат серотонверзације; регистрација позитивног резултата након серонегативног периода ХЦВ [14].

    Један од најважнијих проблема у спровођењу студија о присуству анти-ХЦВ-а је лажно позитиван резултат. Њихов изглед може бити због неспецифичне интеракције компоненти реакције, могућих унакрсних реакција са другим вирусним антигеном и многим другим факторима. Ниво лажно позитивних резултата у детекцији анти-ХЦВ са различитим дијагностичким лековима може да достигне 10-20% [15,16]. Повећан ниво таквих резултата забележен је код пацијената са онколошким и аутоимуним болестима, особама са имунодефицијенцијом и пацијентима са сифилисом [16,17]. Постојање лажних позитивних резултата доводи до задатка лабораторијског радника да их разликује од истинског откривања анти-ХЦВ. Да би се решио овај проблем, серум се детектује у крвном серуму ХЦВ РНК. Међутим, негативни резултат детекције ХЦВ РНК не дозвољава да говори о присутности лажног позитивног откривања анти-ХЦВ. Треба имати у виду да анти-ХЦВ су изоловани и циркулишу у крви пацијента који се опоравио од акутног хепатитиса Ц (10-15%) или чија елиминација ХЦВ РНК дошло као последица терапије.

    ПОТВРЂЕЊЕ (ДОДАТНИ) ТЕСТОВИ. Да би разликовали лажно позитивне узорке и узорке који заиста садрже антитела на ХЦВ, развијени су додатни (додатни) тестови. Најчешће се користи у овим тестовима имуноблот принцип [нпр - РИБА тест ( "Ортхо-Цлиницал Диагностицс"); "ЛиаТек ХЦВ" (Органон Текника)], при адсорбује на нитроцелулозну мембрану у облику појединачних трака антигени кодиран од различитих зона ХЦВ РНК. Анти-ХЦВ интеракцији са адсорбованих антигенима коришћењем антитела ензимом обележени против хуманих Иг Г својим каснијим детекцијом коришћењем супстрата комплекс. У додатним имуноблотом као додатна испитивања користе дијагностичке агенсе за детекцију анти-ХЦВ против специфичних антигена су кодирани од стране различитих зона ХЦВ РНК [ "Спецтрум 4" ( "ИмБио" Низхни Новгород, РецомбиБест АНТИ-ХЦВ-СПЕЦТРУМ "- ЗАО" Вецтор Бест ", Новосибирск, ИФА- Анти-НСО-Спектр, НПО" Дијагностички системи ", Нижниј Новгород].

    Дизајн и имплементација ових тестова је паралелан са увођењем скрининг тестове за анти-ХЦВ, понављајући принцип проширење спектра пептида користе у свакој наредној генерацији дијагностичких агенаса. Дакле, дијагностички РИБА-ИИИ се разликује од претходне генерације додавањем пептида кодираног НС5 зоном. Принципи се потврђују позитиван резултат детекције анти-ХЦВ првенствено обухватају: могућност (у неким случајевима) прецизније резултате ензимске реакције реаговањем са појединачним пептидима као примену у широком спектру ДИАГНОСТИЦУМ пептида који се не користе у тестовима. Само увођење нових пептида омогућава повећање дијагностичке вредности потврдних тестова.

    Тумачење добијених резултата, на пример, у таквом тесту као што је РИБА-ИИИ, укључује три могуће одговоре: позитиван, негативан и неограничен резултат. Последњи од њих је дат у одсуству јасних индикација (према упутству приложеном уз дијагностичког комплета), омогућавајући једно рећи нешто о присуству или одсуству анти-ХЦВ тест узорку. Корелација спектра снимљених одговора током потврдних тестова варира у зависности од карактеристика група пацијената код којих се првенствено открива анти-ХЦВ [18]. Према Ј.М. Павлотски и сар. [19], у половини случајева резултата, тумачени као "нејасан", ХЦВ РНА може бити откривена. По нашем мишљењу, легитимност одговор - "недефинисан откривање резултат анти-ХЦВ", издат од стране особља лекар лабораторијске, евидентно не само у потврдног теста, а рутинске прегледе на присуство анти-ХЦВ. Нужност таквог тумачења добијених резултата је одраз тренутног стања лабораторијске дијагнозе хепатитиса Ц.

    ДЕТЕРМИНАЦИЈА ИгМ АНТИ-ХЦВ. Тренутно су направљени и произведени дијагностички сетови за откривање ИгМ анти-ХЦВ компаније: "Вецтор Бест"; "Дијагностички системи"; "Имбио", "Абботт" итд. У фази пројектовања дијагностичких сетова развијени су ЕЛИСА комплети, базирани на пептидима кодираним различитим регионима ХЦВ РНК [20]. Избор је заустављен на пептиду кодираном Цоре регионом ХЦВ РНК и откривањем ИгМ антитела на њега. Као и код испитивања за откривање анти-ХЦВ (ИгГ), лажно-позитивни резултати могу бити забележени у проучавању ИгМ анти-ХЦВ. Према Стевенсони Д.Л. са ет ал. [21], до 70% пацијената са хроничним хепатитисом Ц са присуством ИгМ анти-ХЦВ истовремено имало је повишени ниво реуматоидног фактора, што доприноси појављивању лажних позитивних резултата. Истовремено, према Павлотски Ј.М., присуство реуматоидног фактора не утиче на квалитет детекције ИгМ анти-ХЦВ [22].

    ДЕТЕРМИНАЦИЈА АНТИГЕНА ХЦВ. Могућност одређивања ХЦВ антигена привукла је пажњу истраживача одмах након откривања вируса. Теоријска могућност њиховог тестирања је показана Кравцзински К. ет ал [23] открио да имунохистохемије у ткиву јетре ХЦВ антигена, демонстрирајући специфичност имунофлуоресценције сјаја. Употреба поли- и моноклоналних антитела разним ХЦВ антигена је утврдила присуство ХЦВ језгра Аг, антигене кодиране НС3 и НС4 зоне ХЦВ РНК у језгру и цитоплазми хепатоцита, у 60-90% болесника са хроничном ХС [24].Међутим, даљња истраживања су показала да антигени ХЦВ могу се открити у мање од 5% ћелија јетре.

    Први дијагностички тест системи ( "Ортхо антитела за Цоре Антиген (мишјих моноклоналних) ЕЛ1СА тест систем" и "Имуцхецк Ф-ХЦВ Аг Цоре Кокусаи") за детекцију ХЦВ антигена појавила на тржишту имунолошких производа у 1999. Као циљ је изабран Цоре детекцију ХЦВ антиген, који се утврђује чврстој фази ЕЛИСА реализацији конструисан на основу моноклоналних антитела. Прве студије о примени ових испитивања су идентификовали своју високу осетљивост, специфичност и обећавајуће апликације, првенствено у служби трансфузије крви [25,26]. Инсталиран:

  • могућност утврђивања језгре Аг ХЦВ у серуму или плазми;
  • специфичност детекције сржи ХЦВ Цоре Аг;
  • присуство особа са циркулационим антигеном у серонегативној крви за анти-ХЦВ;
  • честа (90,3%) детекција Цоре Аг ХЦВ у крвном серуму са присуством анти-ХЦВ и ХЦВ РНК [25];
  • директна корелација између концентрације ХЦВ РНК и детекције сржи АгВ ХЦВ [25];
  • смањујући фазу "прозора" - од тренутка инфекције до првог позитивног резултата откривања анти-ХЦВ. Утврђено је ХЦВ Цоре Аг могуће утврдити 83% случајева (н = 24) је сутрадан после првог откривања ХЦВ РНК [26], и дуге (у просеку 26 дана) пре појаве анти-ХЦВ [27].

    МЕТОДЕ ОДРЕЂИВАЊА РНК ХЦВ. Модерна фаза лабораторијске дијагностике хепатитиса Ц може се окарактерисати као фаза почетка широке примене молекуларних биолошких метода за детекцију ХЦВ РНК. Највећа већина метода за детекцију нуклеинских киселина је тестирана на детекцију ХЦВ РНК. Принципи конструисања дијагностичких препарата и њихова употреба за откривање вирусне ДНК или РНК посвећени су значајном броју прегледа литературе објављених како у домаћим [28] тако иу иностраним публикацијама [29]. Све ове методе могу се поделити у две групе, које су засноване на примени принципа хибридизације без амплификације праћених сегмента нуклеинске киселине или уз амплификацију која може значајно побољшати резолуцију метода.

    Метода хибридизације на основу комбинације сонди означених хибридизацијом (генетски конструисане или синтетичке молекулске структуре које садрже нуклеотидне секвенце комплементарне одабраним РНК локалима). Резултати се узимају у обзир интензитет сигнала који долази од ознаке у композицији формираног комплекса.

    Код хепатитиса Ц, овај метод откривања ХЦВ РНК првенствено је пронашао апликацију за идентификацију директно у хепатоцитима, у тестовима означеним као ин ситу хибидизацију [30]. Могућност директног откривања ХЦВ РНК у ткивима омогућила је откривање у ћелијама мононуклеарних крвних ћелија, ћелијама жлезда и другим ткивима пацијента са хепатитисом Ц [31, 32].

    Метода хибридизације која се користи за откривање ХЦВ РНК омогућава да се покаже присуство негативних (репликативних) ланаца ХЦВ РНК, што указује на активну репликацију вируса [33].

    Метода полимеразне ланчане реакције - тренутно најчешће коришћена методичка метода, која је основа готово свих молекуларних биолошких метода детекције ХЦВ РНК. Штавише, одређивање ХЦВ РНК је могуће иу квалитативним и квантитативним верзијама, што је посебно важно за постављање, праћење и процену ефективности коришћене терапије.

    Главне варијанте методе могу се идентификовати на следећи начин:

  • полимеразна ланчана реакција (ПЦР);
  • лигазна ланчана реакција;
  • НАСБА;
  • ТМА (транскрипцијска амплификована реакција амплификације, амплификација посредована транспипацијом).

    Полимеразна ланчана реакција - који се широко користи у начину откривања ХЦВ РНК како у Русији, тако иу иностранству. Заснован је на вишеквалитетном процесу, који подсећа на природну репликацију нуклеинске киселине, сваки циклус који се састоји од неколико фаза.

    Из студираног материјала (серум или плазма крви, биопсија јетре), ХЦВ РНА се ослобађа. С обзиром да је нуклеинска киселина ХЦВ-а представљена РНК, а за амплификацију је потребан молекул цДНК, ензимом-реверзном транскриптазом, формирају се једноручни молекули ХЦВ цДНК. У следећем кораку, тзв. "ЦДНА" се додаје у одређени део сваког од ланаца ХЦВ цДНК. Примери - кратки олигонуклеотиди, комплементарни са познатим нуклеотидним секвенцама. Поређење примарне структуре региона 5'УТР геномом различитих ХЦВ изолата открило је своју безначајну варијабилност (између генотипова, хомологије нуклеотида - 92-98%, и унутар генотипа 98-99%). Овим је било пожељно одабрати прајмере из ове зоне ХЦВ РНК и њихове употребе у дијагностичким тестним системима произведеним у нашој земљи и иностранству.

    Даље, уз помоћ ДНА-зависног ДНА полимеразног ензима, синтетишу се нови ДНК одељци. Тренутно, извор овог ензима најчешће користе тхермопхилус термус бактерије (Ттх-полимеразе) или тхермопхилус акуатицус (Так-полимераза). Са термичке стабилности у присуству мангана и магнезијума јона, ензим може истовремено користити за синтезу комплементарних једноланчана молекула ХЦВ цДНК и амплификације одабране порције цДНК. У завршној фази јединственог реакционог циклуса, синтеза ДНК синтетизира нове ланце комплементарних ХЦВ цДНК. Вишеструки понављања реакционе циклуса који води до акумулације ХЦВ цДНК фрагмената, који се може регистрована помоћу полиакриламид гел електрофорезе следе визуелну детекцију или преко хибридизацију са олигонуклеотидних проба, што повећава осетљивост и специфичност дијагностичких производа користе. Употреба прајмера означених ензимима омогућава снимање резултата ПЦР-а користећи имуноассаи ензима.

    Стални циљ истраживача који дизајнирају дијагностичке системе за откривање ХЦВ РНК је повећање осетљивости и специфичности. Ова сврха служи варијанта ПЦР, означена као "уграђени ПЦР" [34]. Посебна карактеристика овог метода из "класичног" је истовремена употреба два пара прајмера, од којих је једна комплементарно повезана са унутрашњим подручјем ампликона добијеним након прве рунде амплификације. У исто време, верује се да ова варијанта ПЦР-а има већи ризик од контаминације узорака, што може довести до лажних позитивних резултата [35].

    Акутна потреба за одређивање ХЦВ РНК и сложености повезане са великом производњом високо осетљивих и специфичних дијагностичких сетова за ПЦР дијагностику утврдиле су широку употребу лекова произведених у научним лабораторијама. Упоређивање ових тестних система, такозваних "ин-хоусе" тестова, показало је њихову високу варијабилност у осетљивости и специфичности, као и недостатак репродуктивности резултата између лабораторија и серије дијагностичких лекова. На пример, у првом европском кругу "екстерних" контрола квалитета контроле откривања ХЦВ РНК (1996), од укупно 136 лабораторија, само 22 (16%) су успјели правилно одредити присуство или одсуство вирусне РНК у датим контролним узорцима [36]. Сличан резултат је забиљежен у нашој земљи током сличног рада у оквиру Федералног система контроле спољног квалитета (2001), када су само 3 од 14 лабораторија (21,4%) које су учествовале (21,4%) успјеле правилно ријешити задатак [37].

    Узроци лажно-негативних и лажно позитивних резултата детекције ХЦВ РНК су различити. Са лажно негативним резултатима:
    - губитак или уништавање ХЦВ РНК у припреми за одговор клиничког материјала;
    - присуство у узорку инхибитора који утичу на различите компоненте ПЦР-а. Ови инхибитори су представљени разним хемијским или протеинским супстанцама. На пример: присуство инхибитора реверзне транскриптазе у течности сперме није омогућило откривање ХЦВ РНК и говорећи о могућности примене сексуалног пута преноса хепатитиса Ц [38]; присуство хепаприна [39]; висок ниво криоглобулина у серуму крви [40];
    - непоштовање термичког режима складиштења и транспорта клиничког материјала. Са лажним позитивним резултатима:
    - контаминација између узорака (при обради узорака и / или рад са реакционом смешом), укључујући контаминацију са позитивним контролним узорком;
    - контаминација од производа пре амплификације (амплицонс) који могу контаминирати узорке и решења теста помоћу аеросола или лабораторијске опреме.

    Масовно увођење ПЦР дијагностике по дефиницији РНК ХЦВ-а поставило је тела практичне здравствене заштите задатак преласка на нови ниво спровођења лабораторијских студија. Изолација изолованих зона за главне фазе ПЦР (за припрему узорка, појачање, узимајући у обзир резултате); Одвојени комплет за сваку фазу реакције лабораторијске одеће, аутоматске пипете; постојање стандардних дијагностичких сетова и, што је најважније, доступност висококвалификованог лабораторијског особља омогућава смањење нивоа лажних резултата.

    Оригин стандардизовани сет за ХЦВ РНК ( "АмплицорТМ ХЦВ", "Роцхе Дијагностички системи") произведен у 1993. години. Током година развијени су комплети за откривање ХЦВ РНК, чија је главна сврха била повећање њихове осјетљивости и специфичности. Приликом дизајнирања "Амплицор ТМ ХЦВ" користи неколико оригиналних методолошке техника омогућавају да открије или изнад 100 копија ХЦВ РНК по мл., Као да се баве могућим случајевима контаминације узорака и рјешења користе у сету. Коришћењем ензима - амперази и дезиксиуридинтрифосфата (дУТП) омогућава уништи у првом амплификације циклуса претходном апликони које могу настати контаминације. Деструцтион амперази касно у првом амплификације циклуса (на 55 ° Ц) не дозвољава да ензим уништи амплицонс изабране као мета. Важна иновација била је увођење интерне контроле. Значење ове иновације састоји у увођењу узорка у свакој секвенци тог умнозене ХЦВ РНК дела који потом детектује применом одговарајућих прајмера у реакцији амплификације у истом режиму. Одсуство позитивне реакције у детекцији унутрашње контроле сугерише лажно негативну реакцију на присуство ХЦВ РНК у узорку. Диагностицум следеће генерације лек одређен - "ХЦВ Амплицор 2,0", када се користи ограничење осетљивости која 50 молекуле РНК ХЦВ.

    Систем ХЦВ РНК, користећи "Роцхе" комплета компаније не могу да се посматрати изоловано од своје инструменте, одређује висок квалитет тестирања. Програмери ове методе настојали су да у потпуности аутоматизују све фазе реакције. Оличење ове идеје био је систем "ЦОБАСАмплиПрепТМ", који омогућава да у потпуности аутоматизује процес екстракције ХЦВ РНК, амплификацију и детекцију, чиме се смањује ризик од лажно позитивних и лажно негативни, одржавајући високу осетљивост и специфичност [41].

    Лигасе ланчана реакција детекције РНА БГЦ. (ЛЦР). Метода се заснива на способности ензима "ДНК-зависна ДНК лигаза" да цросслинк (лигат) прекида фосфодиестарску везу у ДНК у присуству АТП и Мг 2+ јона. Као и код "класичног" ПЦР-а за откривање ХЦВ РНК, прва фаза ЛЦР-а је реверзна транскрипција ради добијања ХЦВ цДНК. Надаље, ДНК лигаза везује два пара прајмера (комплементарно са 5 'некодираног ХЦВ РНК региона), који су даље појачани. Детекција ЛЦР амплификационих производа врши се узимањем у обзир реакције антиген-антитела. Сваки од два прајмера је означен различитим хаптеном. Прва од њих је заробљена антителима адсорбована на микрочестице. Након процедури прања користећи други пар антитела обележених са флуоресцентном етикетом је њихова селективна интеракција са хаптеном у амплификације производу, праћено реакцијом подлогу и на рачун флуориметру.

    Сензитивност ове методе је око 200 копија ХЦВ РНК у мл, што омогућава да се користи за рјешавање различитих клиничких и дијагностичких проблема [42]. Тренутно, дијагностички сетови за детекцију ХЦВ РНК, засновани на ЛЦР, производе Абботт.

    Нуклеинске киселине Сеакуенценце амплификација - НАСБА -ХЦВ метода детекције РНК се заснива на истовременом дејству три ензима: реверзне транскриптазе вируса миелобластоми птице, РНКзом Х и Т7 РНК полимеразе [43]. За разлику од РТ ПЦР-а, реверзна транскрипција ХЦВ РНК се не изводи у првој фази. Уз помоћ ензима који се користе, више од 10 (9) копија ХЦВ цДНК странице се може добити у року од 90 минута [44]. Способност реализације реакције на ниским температурама (+41 Ц) знатно поједностављује рад и омогућава напуштање опреме која обезбеђује цикличне промене на високим температурама. Резултати реакције се узимају у обзир електрохемилуминисценцијом. Упркос чињеници да је осјетљивост НАСБА близу РТ ПЦР, ова метода није широко кориштена за откривање ХЦВ РНК. Тренутно се развија варијанта методе која комбинује принципе НАСБА и "Реал РТ РТ ПЦР".

    Метода транзиције-посредоване амплификације (ТМА) разликује се од ПЦР и ЛЦР првенствено у томе што су фрагменти ХЦВ РНК директно појачани, а не ХЦВ цДНА. У почетној фази реакције, прајмер (број 1) је повезан са ХЦВ РНК и копија циљног молекула, цДНА, се синтетизује уз помоћ ензима (реверзна транскриптаза). Реверсна транскриптаза, која такође има активност РНасе-Х, уништава вирусну РНК у хибриду РНК-цДНК. Затим, други пример се припрема за молекул цДНК, након чега следи завршетак двоструке ДНА са реверзном транскриптазом. Користећи други ензим, јавља се РНА полимераза, транскрипција РНК са цДНК, што резултира стварањем 100 до 1000 примерака ампликона ХЦВ РНК у једном реакционом циклусу. Пример бр. 2 је повезан са овим РНА-апиконима уз даљу синтезу копија цДНК и уништавање молекула РНК. Додавање прајмера бр. 1 у цДНК, праћено завршетком двоструке ДНА, покреће следећи циклус амплификације. Резултати реакције се узимају у обзир на луменометру, пошто формирани ампликони РНК специфично комуницирају са сондама ДНА означеним хемилуминапхоресима.

    Као предности ТМА методе при откривању ХЦВ РНК, примећује се:

  • реакција на нижим температурама у поређењу са ПЦР;
  • формирање већег броја ампликона у једном реакционом циклусу, што смањује време потребно за добијање коначног резултата (30-40 минута) и повећава осетљивост реакције (50 копија / мл) [45].
  • смањујући ризик од контаминације, јер је РНА мање стабилна од ДНК.

    Компаративне студије о детекцији ХЦВ РНК од стране ТМА и других метода показале су висок степен коинциденције резултата [45].

    Комбинација принципа хибридизације и амплификације лежи у методи откривања ХЦВ РНК, означеног као "Метода хибридизације коришћењем разгранатих сонди или раздвојеног ДНК теста (бДНА) [46]. За разлику од ПЦР-а у овом тесту, амплификација не укључује молекуле ХЦВ цДНК, већ од сигнала. Реакција се изводи у 96 базенчића, у којима су адсорбованих фрагменти ХЦВ РНК из 5 'нетранслираног региона и језгра-гена ХЦВ РНК. Због накнадно везивање са синтетичким ДНК молекула разгранате и хибридизацијом са пробом обележе са алкалне фосфатазе појачалом и накнадну ензимске реакције се постиже наглим порастом примљеног сигнала. Тренутно постоје диагностицумс трећу генерацију тржишта дијагностички (Баиер 3.0 Хепати-тис Ц Вирус РНА квантитативног Брна) има осетљивост за идентификацију 520 ИУ / мл (2500 примерка ХЦВ РНК).

    КВАНТИТАТИВНА ДЕТЕКЦИЈА ХЦВ РНК. Квантитативна варијанта ПЦР-а се користи за процену концентрације ХЦВ РНК. У почетку, концентрација ХЦВ РНК покушала да окарактерише редних вредности, као што су "+", "++", итд, визуелно одражава интензитет бендова добијених електрофорезе амплификације производа или ограничавањем разблажења, односно присуством позитивног резултата у финалу титрациона тачка. Тешкоће стандардизује сви ПЦР кораци не дозвољавају објективну процену концентрације ХЦВ РНК, што доводи до значајних грешака тумачењу резултата.

    Тренутно, резултати истраживања изражени у квантитативном смислу: број копија ХЦВ РНК садржаних у 1 мЛ, у апсолутном смислу, или логарифметицхеском (лог 10).. На основу чињенице да је концентрација ХЦВ РНК детектованог одражава број вирусних честица, ова цифра се назива "вируса еквивалент (ЕК)", уз додатак префикс к (кило хиљада) или М (ппм). Други начин да се изрази број честица вируса су њихови тјелесни еквиваленти. На пример, у грамима или пицограмима (1 пг одговара око 1 милион ек). Разноликост примењених количина отежава интерпретацију резултата добијених у различитим лабораторијама. Стога, ВХО Екперт Цоммиттее он Биологицал стандардизацији учинило "међународну референтни материјал" садржи ХЦВ РНК (лиофилновисусхеннаиа крвни серум који садржи ХЦВ РНК генотип 1), концентрација која се изражава у интернационалним јединицама (ИУ / мл) [47]. Посебни фактори омогућавају нам да поново израчунамо вредности добијене концентрације у међународне јединице.

    Скоро све варијанте ПЦР-а се користе за одређивање концентрације ХЦВ РНК. При чему дијагностичке формулације да испуне низ специфичних захтева, од којих је најважнија строга резултати линеарност, тј повећање сигнала откривене реакције са повећањем концентрације ХЦВ РНК у тест узорку. Употреба интерних стандарда са различитим садржајем ХЦВ РНК избјегава многе методолошке грешке које могу утјецати на крајњи резултат реакције [28]. Осетљивост примењено дијагностику (Амплицор ХЦВ Монитор в2.0; ЛЦк ХЦВ РНК Куантитативе Ассаи) може детектовати ХЦВ РНК са почетком у 50 копија по мл [48.49], што је посебно важно за предвиђање ефикасности антивирусне терапије одабране.

    ПЦР у реалном времену ("Реал РТ РТ ПЦР") -једна од најперспективнијих опција за квантитативну методу за детекцију ХЦВ РНК. Метод и његов хардвер заједнички су развили стручњаци Роцхеа и Перчина Елмера. Принцип методе је способност хидролизе цДНА секвенце у правцу 5 '---- 3'. У реакцији се користи посебна сонда, означена са две флуоресцентне боје са блиском апсорпцијом и макима флуоресценције. У присуству производа за амплификацију Таг-полимераза цепи сонду, која спречава пренос енергије из једног молекула боје на другу, и на тај начин спречава ослобађање кванта светлости. Посебан уређај узима у обзир реакцију и математичко моделирање флуоресцентне кинетике у свакој фази реакције, што омогућава добијање информација о почетној концентрацији ХЦВ РНК.

    Сматра што чини разлику у "реалном времену ПЦР" могуће добити информације о присутности ХЦВ РНК директно током реакције, чиме се смањује време теста у комбинацији са високом осетљивошћу и линеарност резултата [50]. Према Татјании Иасхина и коаутори, ова метода дозвољава детекцију од 200 копија ХЦВ РНК у мл. [51].

    МЕТОДЕ ГЕНОТИПИРАЊА РНА ВХЦ. Одређивање припадности ХЦВ одређеном генотипу и подтипу нашла је своју примјену за рјешавање не само чисто научних, већ и практичних питања. На пример: тражење извора инфекције током епидемија хепатитиса Ц или предвиђање ефективности коришћене терапије.

    "Златни стандард" генотипизације ХЦВ-а је директно одређивање примарне структуре ХЦВ РНК са његовом накнадном филогенетском анализом [52], што омогућава да се овај изолат вируса јасно карактерише. Можете добити ове информације користећи следеће опције секвенцирања:

  • директан;
  • на основу стандардног клонирања;
  • секвенцирање производа ПЦР реакције (ограничено секвенцирање).
    Упркос тачности резултата, метод директне секвенце се не користи у практичној здравственој заштити због техничких потешкоћа у спровођењу истраживања и високих трошкова рада. Истовремено, доступност информација о примарној структури ХЦВ РНК је референтна метода генотипизације, а доступност аутоматских уређаја за секвенцирање поједностављује резултате.

    Тренутно, у већини случајева, за генотипизацију ХЦВ РНК користе се методе базиране на употреби ПЦР-а са прајмерима специфичним за тип. Прво генотипизовање ХЦВ РНК извршио је Н. Окамото и други. У 1992. години са РТ-ПЦР [53], који укључује два корака амплификације. Први је изведен са универзалним прајмерима за све генотипове ХЦВ-а, други са мешавином специфичних прајмера за добијање специфичних производа за амплификацију различитих дужина. Присуство одређеног генотипа оцењено је по величини амплификованог производа. Као прајмери ​​се користе специфичне сонде типа, информације о којима се налазе у 5'УТР, Цоре или НС5 регионима РНКВС [54].

    Хибридизација појачан производа са сондама генских специфичан апсорбовани (од 5 'нетранслираном региону ХЦВ РНК), адсорбује на нитроцелулозну мембрану, лежи у основи теста - означен "ИННО-ЛиПА ХЦВ, ИННО-Генетицс" [55]. На почетку помоћу овог теста могуће је уобличити генотипове: ла; лб; 2а; 2б; 3а; 3б; 4 и 5а. Затим тест систем 2нд генератион "ИННО-ЛиПА ХЦВ ИИ, Инногенетицс" дозволи да разликује све генотипове 6 и даљи 2Ц; 2д; 2и; 3ц; 4а-х; 6а и 10а. [56]

    Методолошки арсенал генотипизације ХЦВ није ограничен на горе наведене методе и обухвата низ различитих метода:

  • генотипизација заснована на анализи ограничених профила амплификованих производа (РФЛП). Производи амплификације фрагмената ХЦВ РНК (5'УТР-регион или НС5 ХЦВ РНА регион) разблажују рестрикционим ензимима. Формирани фрагменти варирају у дужини, у зависности од мјеста ограничења у оквиру кога се одвајају. Резултати електрофорезе и њихова упоређивања омогућавају идентификацију ХЦВ генотипа у тестном узорку [57]. Поређење резултата генотипизације помоћу методе ПЦР-РФЛП са секвенционим подацима показало је висок степен коинциденције резултата - 95% [58].
  • генотипизација заснована на ССЦП методи (процена конформационог полиморфизма једноручних фрагмената ДНК). 5-непреведени регион ХЦВ РНК, који има минималан скуп нуклеотидних варијација који разликују генотипове једни од других, изабран је као предмет истраживања. Ова чињеница одређује могућност примене заједничких прајмера за генотипизацију [59].

    СЕРОТИПИРАЊЕ Анти-ХЦВ Истраживање је омогућен захваљујући П.Симмондс ет ал, утврђивање присуства антитела усмерених на епитопе генотипспетсифицхним које информације кодиране НС4 ХЦВ РНК зоне [60]. Са диагностицум за ЕЛИСА граде на бази синтетичких пептида, способан да диференцира случајева хепатитиса Ц, изазване вирусима 1, 2 и генотип 3 (89% поклапају са резултатима генотип). Девелопмент тестсистем користе синтетске и рекомбинантних антигене кодиране од стране НС4 и Основним зонама ХЦВ РНК енханцед лист типеабле варијанте вируса и подтипове експерт присутности (1а, лб, 2а, 2б, Овер и 4а) [61,62]. Тренутно комерцијални издање дијагностичких препарата за серотипинг у извођењу спот ЕЛИСА - "НА Мурех 1-6 Серотипинг тесту Мурек Дијагностика", ау извођењу "имуноблотом" - РИБА ХЦВ Серотипинг испитивању, Цхирон Диагностицс. Упоредни подаци о серотипизацији и генотипизацији ХЦВ РНК показали су висок ниво коинциденције резултата, достигавши 95% [62].

    Серотипизација анти-ХЦВ у поређењу са генотипизацијом ХЦВ РНК има такве предности као што су једноставност реакције и нижи трошкови. Истовремено, ова метода у сваком случају не може заменити генотипизацију. Резултати серотипизације анти-ХЦВ-а сведоче о типу анти-ХЦВ у тренутној или претходно пренесеној инфекцији. У неким случајевима (најчешће код пацијената са хемофилијом) забележено је истовремено детекцију анти-ХЦВ различитих подтипова, што може указати на вишеструку инфекцију са различитим подтиповима и генотиповима ХЦВ [63]. Поред тога, код пацијената са хепатитисом Ц на позадини израженог стања имунодефицијенције, РНА може бити једини маркер, што онемогућава извођење серотипа.

    ДЕТЕКЦИЈА И ТРАЦИЈА РЕЗУЛТАТА ТЕСТИРАЊА СЕРОЛОШКИХ МАРКЕРА ХЦВ-ИНФЕКЦИЈЕ. Широк спектар серолошких маркера текућег или претходног ХЦВ инфекције, као модерног методолошког оквира може да реши многе проблеме у лабораторијској дијагностици и превенцији хепатитиса Ц. Табела 2 показује број серолошких маркера ХЦВ инфекције и најзначајније области њиховог тестирања.

    Табела 2
    Дијагностички значај маркера тренутне или претходне ХЦВ инфекције

    Сцреенинг
    у служби
    крв

    Потврда
    тхе
    резултат
    + анти-ХЦВ

    Један од главних задатака лабораторијске дијагнозе хепатитиса Ц јесте дијагноза и одвајање акутне од хроничног хепатитиса Ц идентификовањем серолошких маркера инфекције. Као и код других акутних вирусних хепатитиса, серолошки маркери ХЦВ инфекције доследно се појављују и нестају током тока инфекције и процес опоравка (Слика 2).

    ХЦВ РНА се може открити 7-21 дана након ХЦВ инфекције и анти-ХЦВ на дан 20 до 150 (у просјеку, 50. дан) [64]. Спектар анти-ХЦВ може се разликовати у зависности од периода акутног хепатитиса. Верује се да први који откривају антитела кодирана Цоре и НС5 регионом ХЦВ РНК. Анти-ХЦВ протеини кодирани са НС4 зоном нису присутни у акутној фази хепатитиса Ц [65]. Компаративна студија нивоа концентрација анти-ХЦВ, спектра анти-ХЦВ и ХЦВ РНК код пацијената са акутним и хроничним хепатитисом показала је неке разлике [66]. По нашем мишљењу, ове разлике могу бити повезане са индивидуалним карактеристикама заразног процеса, што смањује њихову дијагностичку вриједност.

    Сл. 2. Акутни хепатитис Ц

    По аналогији са лабораторијску дијагностику хепатитиса А и Б се очекује антитела на ХЦВ ИгМ класе ће бити велик као дијагностичку вредност ИгМ анти-ХАВ и ИгМ анти-ХБЦ. Међутим, они тест серуми болесника са акутним и хроничним хепатитисом Ц у присуству ИгМ анти-ХЦВ искажу своју честе идентификацију код ових пацијената - 50-93% и 50-70%, респективно [67,68], ови резултати показују да откривање ИгМ анти -ХЦВ не може се користити као маркер акутне ХЦВ инфекције.

    Одсуство маркера који тврди да је "златни" стандард акутног хепатитиса Ц одређује потребу за свеобухватном оцјеном добијених резултата на основу динамичког посматрања пацијента.

    Једнако важна област употребе високо осетљивих метода за тестирање ХЦВ РНК - смањење ризика посттрансфузионог хепатитиса Ц. Потреба за таквим радовима одређује присуство фазе "прозора", тј. време између прве детекције ХЦВ РНК и појављивања анти-ХЦВ, као и постојање донатора крви (пацијенти са хроничним хепатитисом Ц) који имају ХЦВ РНК у одсуству анти-ХЦВ. Садашњи систем праћења крвних донација за ХЦВ укључује само тестирање анти-ХЦВ-а, ризик од настанка хепатитиса Ц се наставља. Полазећи од овога, легитимно је поставити питање тестирања крви за присуство ХЦВ РНК савременим методама (НАТ методе су "тест амплификације нуклеинске киселине"). Фактор који ограничава овај рад је висока цена истраживања. Да би се смањили трошкови, препоручује се тестирање базена серума крви (од 8 до 96 узорака) уз накнадно потраживање позитивног узорка у случају откривања ХЦВ РНК у базену серума. Узимајући у обзир фактор разблаживања жељене ХЦВ РНК када су крвни серуми надувани, питање примјене најсензибилнијих метода детекције постаје од главне важности. Сматра се да употреба дијагностичких комплета за НАТ - са сензитивношћу од 50-100 ИУ / мЛ може значајно смањити ризик од посттрансфузијског хепатитиса Ц.

    Без сумње, списак проблема који се могу решити приликом тестирања читавог спектра маркера ХЦВ инфекције није ограничен на ова два подручја. Доступност модерних метода испитивања у комбинацији с познавањем њихових способности отвара широке перспективе за научно и примењено истраживање о хепатитису Ц.


  • Повезани Чланци Хепатитис